非传统型肌球蛋白Myo10对结肠癌细胞SW620生长的影响及其机制

• 作者: 刘羽 周云峰 张斌 欧海斌 江耀飞 沈惠 邵晶 隋铭
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Myo10 CRISPR/Cas9 SW620 细胞增殖 细胞周期
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 肿瘤学研究
• 页码范围: 552-557
• 页数: 6页
• 分类号: R735.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.14188/j.1671-8852.2019.0155

摘要

目的:利用CRISPR/Cas9技术构建Myo10蛋白敲除稳定细胞系,探讨Myo10对结肠癌细胞SW620形态、增殖和细胞周期的影响.方法:根据sgRNA设计网站选择并合成5对针对人Myo10基因的sgRNA序列,经退火形成双链后,用T4 DNA连接酶将其与经BsmB Ⅰ线性化的Lenti-CRISPR v2慢病毒载体连接,包装成病毒感染SW620细胞.经嘌呤霉素筛选后用Western Blot检测Myo10的表达,选择敲除效率最高的sgRNA序列,进行单克隆细胞筛选,最后再用Western Blot验证Myo10是否敲除.用显微镜、Rhodanmine phalloidin细胞染色观察细胞形态;CCK-8实验及流式细胞术检测细胞增殖及细胞周期变化.结果:经测序鉴定成功构建了5对sgRNA-Lenti-CRISPR v2慢病毒载体,嘌呤霉素筛选后得到Myo10完全敲除的SW620细胞系.敲除Myo10的SW620细胞形态变圆,其增殖能力明显减弱,细胞周期S期比例增加.结论:成功构建Myo10完全敲除的SW620稳定细胞系;Myo10可影响SW620细胞形态和增殖能力;该实验为后续深入探讨Myo10作为结直肠癌潜在靶向基因的机制研究奠定了基础.