二氧化硅刺激的巨噬细胞源性外泌体miRNA表达谱差异

• 作者: 林晓芳 王蕾 胡永斌 蒋海鹰 覃小峰 陈慧 陈慧萍
• 来源期刊: 中南大学学报（医学版）
• 关键词: 硅肺 外泌体 miRNAs 巨噬细胞 高通量测序
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1089-1098
• 页数: 10页
• 字数: 5738字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11817/j.issn.1672-7347.2019.180608

摘要

目的:分析游离二氧化硅(silicon dioxide,SiO2)粉尘刺激的RAW264.7巨噬细胞源性外泌体miRNA的表达差异.方法:以SiO2(200 mg/L)刺激RAW264.7巨噬细胞48 h(exo_48 h组)后收集上清液,超速离心法提取上清中的外泌体;使用透射电镜扫描、纳米微粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术、蛋白质印迹法鉴定外泌体;提取外泌体miRNA行高通量测序,比较exo_control组(以不含SiO2粉尘的培养基孵育RAW264.7巨噬细胞48 h)与exo_48 h组外泌体miRNA表达差异;采用miRanda,TargetScan和starBase 3个软件进行差异miRNA的靶基因预测,对靶基因进行GO(gene ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析,进一步分析基因的生物学功能.结果:在透射电镜下,外泌体为不均匀分布的、圆形或椭圆形的、脂质膜包被的、直径30～100 nm的囊泡;粒径检测显示其体积峰度集中在40～100 nm;蛋白质印迹法显示外泌体标志蛋白质TSG101表达阳性.高通量测序筛选出148个差异表达的外泌体miRNA.与exo_control组相比,exo_48 h组miR-219c-3p,let-7d-3p,let-7a-1-3p,miR-328-3p,miR-365-3p,miR-7219-3p等显著上调,miR-378d和miR-5106等显著下调.靶基因预测结果、GO和KEGG分析结果显示靶基因主要富集在mTOR信号通路、Wnt信号通路、TGF-β信号通路等.结论:SiO2诱导的巨噬细胞产生的外泌体包含丰富的miRNA,且其表达存在显著差异,这些差异的miRNA可能参与了肺成纤维细胞的活化、上皮间质转化等过程.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡永斌	中南大学湘雅医院病理科	43	168	8.0	11.0
2	蒋海鹰	中南大学湘雅医院病理科	61	424	11.0	17.0
3	王蕾	中南大学湘雅医院病理科	24	71	5.0	8.0
4	陈慧	中南大学湘雅基础医学院病理学系	32	281	9.0	16.0
5	陈慧萍	中南大学湘雅医院病理科	2	0	0.0	0.0
6	覃小峰	中南大学湘雅基础医学院病理学系	2	0	0.0	0.0
7	林晓芳	中南大学湘雅基础医学院病理学系	2	0	0.0	0.0