CRISPR质粒和同源重组模板的共转染可降低CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率

• 作者: 刘德培 张祝琴 林琼
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9系统 共转染 分开转染 同源重组模板
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1048-1054
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 3029字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨CRISPR质粒和同源重组模板的共转染对CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率的影响以及可行的解决办法.方法 用T7E1内切酶实验和RT-qPCR检测只转染CRISPR质粒组和质粒和模板共转染组细胞内Cas9的切割效率,Cas9 RNA和DNA水平的差异;RT-qPCR检测降低共转染的模板DNA的数量时,细胞内Cas9 DNA和RNA水平的变化;RT-qPCR和T7E1内切酶实验检测先转染CRISPR质粒后转染同源重组模板时,细胞内Cas9 DNA和RNA水平以及切割效率的变化.结果 与只转染CRISPR质粒组相比,CRISPR质粒和同源重组模板的共转染显著降低了CRISPR质粒的转染效率(P<0.001)和Cas9的切割效率(P<0.001).而先转染质粒后转染同源重组模板组和只转染质粒组在CRISPR质粒的转染效率和Cas9的切割效率差别无统计学意义.结论 CRISPR质粒和同源重组模板的共转染降低了CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率,而先转染质粒后转染同源重组模板可以解决这一问题.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘德培	中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室	32	162	7.0	11.0
2	张祝琴	中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室	6	2	1.0	1.0
3	林琼	中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0