白蜡虫far3基因cDNA全长克隆、原核表达和酶活分析

• 作者: 杨璞 王雪庆 赵遵岭
• 来源期刊: 四川动物
• 学科: 生物学
• 关键词: 白蜡虫 脂酰辅酶A还原酶 cDNA末端快速扩增技术 原核表达 酶活分析
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 149-156
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 字数: 5468字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11984/j.issn.1000-7083.20180328

摘要

脂酰辅酶A还原酶(FAR)可将脂酰辅酶A还原为相应的脂肪醇,在白蜡生物合成中起至关重要的作用.本研究通过cDNA末端快速扩增技术获得白蜡虫Ericerus pela far3基因cDNA全长,其开放阅读框(ORF)1 566 bp.对白蜡虫FAR3编码蛋白进行系统发育分析,发现FAR3与人类Homo sapiens、小鼠Mus musculus、黑腹果蝇Drosophila melanogaster等物种的FAR聚为一支;成功构建pET-30a eGFP/EpelFAR3原核表达质粒,转人大肠杆菌Escherichia coli BL21感受态细胞,在浓度为0.05 mmol·L-1的异丙基硫代半乳糖苷诱导6h后有较高的蛋白表达量;经Western blot验证,表达蛋白分子量与预估蛋白分子量符合;质谱分析蛋白质分值为3 900,肽段覆盖度74％,所得肽段与理论序列相符;利用底物C24脂酰辅酶A、C26脂酰辅酶A、C28脂酰辅酶A和C30脂酰辅酶A对原核表达蛋白进行活性分析,利用气相色谱进行蛋白活性验证,没有理论产物相应脂肪醇的生成.本研究中白蜡虫fa3 cDNA ORF 的获得及原核表达的实现,为进一步的功能和组织表达定位研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨璞	中国林业科学研究院资源昆虫研究所国家林业局资源昆虫培育与利用重点实验室	14	80	5.0	8.0
2	王雪庆	中国林业科学研究院资源昆虫研究所国家林业局资源昆虫培育与利用重点实验室	3	3	1.0	1.0
3	赵遵岭	中国林业科学研究院资源昆虫研究所国家林业局资源昆虫培育与利用重点实验室	4	3	1.0	1.0