猪伪狂犬病病毒IgA抗体间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 侯继波 刘国阳 华涛 卢宇 唐波 常晨 张道华 张雪花 许家荣 黄雨晴
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病病毒 gB基因 原核表达 IgA 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1346-1353
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0198

摘要

为了建立检测猪伪狂犬病病毒(PRV)黏膜免疫时特异的IgA抗体的间接ELISA方法,本研究采用PCR方法扩增了PRV gB基因截短片段,并将其连入原核表达质粒pGEX-6P-1,构建的表达质粒转化至大肠杆菌Transetta(DE3)菌株后,采用IPTG进行诱导表达,得到gB重组蛋白的可溶性表达,并用谷胱甘肽亲和层析柱进行蛋白纯化.以纯化的gB重组蛋白作为包被抗原,以山羊抗猪IgA-HRP为二抗,建立了猪伪狂犬病病毒IgA的间接ELISA检测方法.经ELISA反应条件优化,确定抗原包被浓度为2.4μg/mL,封闭液为10 g/L明胶,一抗37℃孵育1.5h,二抗1:20 000稀释后37℃孵育0.5h,TMB显色液显色10 min.该方法的批内和批间变异系数均小于10％,重复性较好.利用该间接ELISA方法对PRV黏膜免疫的仔猪进行检测,结果可以在鼻腔黏液中检测出特异的IgA抗体.本试验为PRV黏膜免疫提供了初步检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢宇		13	159	6.0	12.0
2	常晨		5	6	2.0	2.0
3	许家荣		32	144	6.0	10.0
4	唐波		15	190	8.0	13.0
5	刘国阳		2	0	0.0	0.0
6	侯继波		2	0	0.0	0.0
7	黄雨晴		2	0	0.0	0.0
8	华涛		1	0	0.0	0.0
9	张雪花		1	0	0.0	0.0
10	张道华		1	0	0.0	0.0