香烟烟雾提取物对RAW264.7细胞增殖、自噬的影响及机制

• 作者: 刘金城 徐李蓥 李文月 王慧慧 王曼丽 穆敏 胡东 胡乐林 邢应如 邹元杰 陶欣荣
• 来源期刊: 卫生研究
• 学科: 医学
• 关键词: 香烟烟雾提取物 RAW264.7细胞 增殖 自噬
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 970-975
• 页数: 6页
• 分类号: R163|Q26|TS411
• 语种: 中文

摘要

目的 研究香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对RAW264.7细胞增殖、自噬的影响及其机制.方法 以RAW264.7细胞作为实验对象,实验分为对照组、阳性对照组(剥夺血清)和CSE组(2％、3％、4％、5％ CSE).利用增强型CCK-8试剂盒测定CSE对RAW264.7细胞增殖的毒性作用,Western blot实验、mRFP-GFP-LC3细胞荧光斑点计数进行CSE影响RAW264.7细胞自噬及其机制的研究.结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,处理时间为24 h,CSE组吸光度值(0.671±0.03、0.746±0.10、0.584±0.07、0.588±0.05)显著下降,显示CSE有效抑制了RAW264.7细胞的增殖,且差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot实验结果显示,与对照组相比,CSE组LC3B蛋白表达量增加且最高表达量在6 h(6.612±0.35)、12 h(4.383±1.99)和24 h(5.781±0.78)均不同,P62蛋白表达量下降且最低表达量在6 h(1.815±0.08)、12 h(0.274±0.06)和24 h(0.414±0.06)也不同,P-mTOR(1.744±0.15)、P-AKT(0.376±0.03)蛋白表达量下降,差异具有统计学意义(P＜0.05),而Beclin1蛋白表达量无明显变化,差异无统计学意义.mRFP-GFP-LC3细胞荧光斑点计数结果显示,CSE组绿色荧光斑点(GFP)显著减少,红色荧光斑点(mRFP)稳定不变,mRFP-GFP结合后显示为黄色和红色斑点.结论 CSE对RAW264.7细胞的增殖具有毒性作用,且通过AKT/mTOR信号通路诱导RAW264.7细胞产生自噬.