甲型流感病毒H1N1pdm09与PR8感染C57BL/6小鼠诱生特异性CD8+T细胞免疫应答的比较研究

• 作者: 任晓楠 刘洋 周晓辉 李顺 杨华 王超 秦波音 谭丹
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甲型流感病毒 特异性CD8+T细胞 免疫应答 功能耗竭
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 561-570
• 页数: 10页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 6941字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2019.05.003

摘要

目的 比较甲型流感病毒H1N1两亚型毒株A/Shanghai/37T/2009(H1N1)(pdm09)临床分离株和A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)标准株感染C57BL/6小鼠后,其病理状态的改变及诱生特异性CD8+T细胞的免疫反应.方法 ①用9.85×106半数组织细胞感染剂量(50％tissue culture infective dose,TCID50)的PR8和pdm09病毒分别滴鼻感染野生型C57BL/6小鼠,每日(连续14 d)观察其状态并记录死亡情况.于感染后第1、3天处死小鼠,取其肺称重计算肺指数;左叶肺经4％多聚甲醛固定后进行H&E(hematoxylin-eosin staining)染色,观察感染后肺的病理变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺病毒载量.② 用0.25倍半数致死量(lethal dose 50％,LD50)的PR8和pdm09分别滴鼻感染小鼠,每日称重连续观察.于感染后第8天解剖取肺和脾,通过H&E染色比较肺部病理改变;通过流式细胞术(FACS)检测脾病毒特异性CD8+T细胞数量比例,以及IFN-γ、TNF-α、IL-2、granzyme B等细胞因子和免疫抑制检查点分子PD-1、LAG-3、Tim-3、CTLA-4的表达情况.结果 ①以相同TCID50流感病毒感染后,两组小鼠均出现疾病状态.PR8组小鼠感染第5天全部死亡,死亡率显著高于pdm09组(P<0.01);第1、3天肺指数和病毒载量的结果PR8组均显著高于pdm09组;H&E染色结果显示PR8组病理损伤严重,肺泡壁增厚,出现肺实质化,血细胞渗出增多,而pdm09组小鼠肺组织病理损伤较轻,炎症浸润少;② 以相同LD50流感病毒感染后,PR8组小鼠的体重损失和肺组织病理损伤均比pdm09组严重;流式结果显示PR8组诱生的病毒特异性CD8+T细胞比例高于pdm09组,但是PR8组中活化的CD8+T细胞(CD8+CD44High)表达的IFN-γ、IL-2和TNF-α显著低于pdm09组;检测该群细胞免疫功能耗竭分子,发现其表达了更多的免疫抑制分子PD-1和LAG-3.结论 PR8相对于pdm09能够对小鼠造成更严重的损伤,可能是因为其活化的特异性的CD8+T细胞出现功能耗竭导致特异的免疫保护力受损,抵抗和清除病毒的能力下降,故而造成更严重的病理损伤.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王超	复旦大学附属公共卫生临床中心	40	220	9.0	13.0
2	杨华	复旦大学附属公共卫生临床中心	51	345	11.0	16.0
3	刘洋	复旦大学附属公共卫生临床中心	50	245	7.0	14.0
4	任晓楠	复旦大学附属公共卫生临床中心	5	2	1.0	1.0
5	李顺	复旦大学附属公共卫生临床中心	10	10	2.0	2.0
6	周晓辉	复旦大学附属公共卫生临床中心	13	19	3.0	3.0
7	秦波音	复旦大学附属公共卫生临床中心	4	3	1.0	1.0
8	谭丹	复旦大学附属公共卫生临床中心	2	2	1.0	1.0