表达CTLA4抗体的重组流感病毒构建及溶瘤效果研究

• 作者: 包金风 孙芳 杨晓岚 杨鹏辉 段跃强 王希良 王立朋 程晋霞 董锁花
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 溶瘤病毒 免疫检查点抑制剂 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 444-450
• 页数: 7页
• 分类号: R730.54
• 语种: 中文
• DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20190068

摘要

目的 拯救表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒, 全面鉴定并体内外实验评价其溶瘤效果.方法 利用流感病毒反向遗传学 (reverse genetics, RG) 技术, 以A/Puerto Rico/8/34 (PR8) 为载体, 分别在PR8病毒PB1和PA基因片段插入免疫检查点CTLA4抗体的重链和轻链构建重组质粒pFlu-CTLA4-PB1、pFlu-CTLA4-PA, 与PR8病毒的其余6个质粒pHW191-PB2、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M、pHW198-NS共转染COS-Ⅰ和MDCK细胞, 经拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤流感病毒, 命名为rFlu-muCTLA4.通过血凝试验、EID50、PCR等方法全面鉴定;ELISA测定anti-CTLA4抗体含量;3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulphophenyl)-2H-tetrazolium 3-(4, 5-二甲基噻唑-2-基)-5 (MTS) 细胞活力测定重组病毒对小鼠肝癌H22细胞的杀伤效果;利用小鼠肝癌模型, 评价重组病毒在体内对肿瘤的抑制效果.结果 rFlu-muCTLA4的血凝效价为29～210, 且能够在鸡胚中稳定传代;EID50为10-8EID50/ml;重组病毒的PB1、PA片段与预期大小一致;重组病毒接种鸡胚培养2 d可检测到anti-CTLA4抗体, 4天达到高峰值.MTS结果显示, rFlu-muCTLA4能特异性杀伤H22细胞活力, 呈现剂量依赖性.动物实验表明, 重组病毒能显著减小小鼠肝癌肿瘤体积, 提高动物存活率并延长存活时间.结论 表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒rFlu-muCTLA4在体内外能靶向杀伤肝癌细胞, 有望为溶瘤病毒靶向治疗肝癌提供新的思路.