利用实时荧光定量PCR技术检测毒素基因快速鉴定A/B型肉毒梭菌方法的建立

• 作者: 史芸 叶长芸 徐雪芳 黄英
• 来源期刊: 疾病监测
• 学科: 工学
• 关键词: A/B型肉毒梭菌 实时荧光定量PCR 特异性 灵敏性
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 844-848
• 页数: 5页
• 分类号: TS252.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2019.09.015

摘要

目的 建立针对A/B型肉毒梭菌毒素基因的实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测方法,构建标准曲线,评价该方法的特异性、敏感性及检测下限,以提高肉毒梭菌检测的快速性、准确性.方法 根据肉毒梭菌A/B型毒素基因设计特异性引物及探针,优化反应条件,建立real-time PCR反应体系.用25种细菌评价该方法的特异性,使用含有A/B型毒素基因特异性序列的重组质粒标准品构建标准曲线,模拟粪便标本,评价建立方法的灵敏度.结果 建立的real-time PCR检测方法特异性好,携带A/B型毒素基因的重组质粒均出现相应特异性扩增曲线,对其他25种细菌进行试验扩增时,均未见出现特异性扩增曲线.根据重组质粒标准品构建的标准曲线可确定其对肉毒梭菌A/B型毒素基因检测灵敏度分别为5.04×102拷贝/μl和6.91×102拷贝/μl.模拟粪便标本中含有目的基因重组质粒的检测下限为A型1.71×103拷贝/μl,B型2.14×103拷贝/μl.结论 本研究设计了适合检测国内肉毒梭菌A/B型的引物和探针,建立real-time PCR快速检测体系,为我国肉毒梭菌A/B型菌株的快速鉴定提供一种新的技术手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	史芸	北京化工大学材料科学与工程学院	1	2	1.0	1.0