配对盒基因6/小鼠胚胎干细胞细胞系的建立及干细胞生物学特性分析

• 作者: 丁玲 李红 胡蓉 苏敏 高杰
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 配对盒基因6 小鼠胚胎干细胞 基因转染 G418筛选 流式细胞术 小鼠
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 细胞和分子生物学
• 页码范围: 451-458
• 页数: 8页
• 分类号: R329.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.04.008

摘要

目的 建立配对盒基因6(Pax6)/小鼠胚胎干细胞(mESCs)细胞系并鉴定其干细胞生物学特性.方法 体外培养mESCs,将重组载体pEF1 α-Pax6-IRES-AcGFP和空载体pEF1α-IRES-AcGFP分别用脂质体法转染mESCs,经G418梯度及荧光蛋白双筛选后,使用细胞免疫荧光染色、免疫印迹法及RT-PCR技术检测Pax6的表达情况,流式细胞术检测Pax6/mESCs阳性细胞的比例.将获得正确的细胞系分别采用细胞免疫荧光染色对其干细胞标志物阶段特异性胚胎抗原1(SSEA1)、八聚体结合转录因子4(OCT4)进行检测,碱性磷酸酶(AP)染色法对其多能性进行检测,流式细胞术检测增殖指数Ki67.将Pax6/mESCs进行肾背囊下移植,移植物行HE染色观察其分化能力.结果 Pax6成功在mESCs内表达,经G418筛选后,获得Pax6/mESCs细胞系,流式结果显示,Pax6阳性率为90％,免疫荧光显示,干细胞标志物SSEA1、OCT4表达阳性且AP染色阳性,并且在体内移植后能向3个胚层分化.结论 Pax6成功在mESCs内表达,经G418筛选后,获得细胞系Pax6/mESCs并维持良好的干细胞特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李红	贵州医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室	47	102	6.0	7.0
2	胡蓉	贵州医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室	17	21	3.0	3.0
3	高杰	贵州医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室	13	13	3.0	3.0
4	苏敏	贵州医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室	12	17	3.0	3.0
8	丁玲	贵州医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室	5	1	1.0	1.0