尿液外泌体提取优化及冷冻对外泌体RNA含量的影响

• 作者: 刁艳君 南阿妮 杨柳 苏明权 郝晓柯 马越云
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 尿液 外泌体 外泌体RNA 反复冻融
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 外泌体分子标志物检测
• 页码范围: 325-330
• 页数: 6页
• 分类号: R446.1
• 字数: 5537字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2019.05.02

摘要

目的 对现有沉淀法提取尿液外泌体进行优化,并探讨不同的储存条件对尿液外泌体RNA含量的影响.方法 分别用先浓缩后沉淀法和直接沉淀法提取人尿液标本中的外泌体,比较两种方法的分离效率和成本;采用ExoQuick-TCTM沉淀试剂盒提取外泌体;纳米粒子跟踪分析技术(NTA)检测外泌体浓度及粒径分布;动态光散射技术(DLS)检测外泌体电位;透射电镜(TEM)观察外泌体形态;western blot检测外泌体标记分子CD63及Alix蛋白的表达;另取10例临床尿液标本验证先浓缩后沉淀的提取方法,以证实优化方法的可靠性.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测20例前列腺癌患者尿液外泌体经过反复冻融(新鲜、1、3、5次)及9例前列腺癌患者尿液外泌体在-80℃冷冻不同时间(新鲜、1周、2周、1个月)时外泌体RNA标志物let-7c和PSA mRNA的表达量,并采用Wilcoxon秩和检验进行统计学分析.结果 NTA检测两种方法提取的外泌体粒径分布为30～150 nm,均为单峰;DLS结果显示,两种方法提取的外泌体电位均呈负值;透射电镜观察两种方法提取的外泌体大小较为一致,直径分布为30～150 nm;western blot检测证实优化方法存在外泌体标记分子CD63及Alix蛋白;10例尿液标本提取的外泌体浓度约为109～1011 particles/mL.外泌体经过5次冻融后let-7c和PSA mRNA含量明显下降,Z值分别为-1.69、-1.73(P均<0.05).而外泌体在-80℃冷冻1个月后其RNA含量保持稳定.结论 优化后的外泌体提取方法在保证外泌体浓度和质量的前提下极大地降低成本,分离得到的外泌体在-80℃短时间冷冻后其RNA含量保持稳定,但不能反复冻融超过5次.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝晓柯	第四军医大学第一附属医院检验科	322	1751	18.0	23.0
2	马越云	第四军医大学第一附属医院检验科	112	451	11.0	15.0
3	苏明权	第四军医大学第一附属医院检验科	226	1052	14.0	20.0
4	杨柳	第四军医大学第一附属医院检验科	99	517	12.0	17.0
5	刁艳君	第四军医大学第一附属医院检验科	5	7	2.0	2.0
6	南阿妮	第四军医大学第一附属医院检验科	1	1	1.0	1.0