乳酸片球菌AS1.2696来源的α-L-鼠李糖苷酶酶学性质分析

• 作者: 可丛雪 杜丽琴 王子龙 郑芳芳 郭双双 韦宇拓 黄日波
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 乳酸片球菌 α-L-鼠李糖苷酶 克隆表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 160-169
• 页数: 10页
• 分类号: Q814
• 字数: 9362字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20180104-044

摘要

克隆表达乳酸片球菌AS1.2696菌株中的α-L-鼠李糖苷酶基因,研究重组酶的酶学性质.分析乳酸片球菌AS 1.2696菌株的全基因组序列,聚合酶链式反应扩增目的基因,以pSE380为表达载体构建重组质粒pSE-prhα2和pSE-prhα3,在大肠杆菌Escherichia coli XL-blue进行表达,使用镍亲和层析纯化重组蛋白,研究重组酶PRHA2、PRHA3的酶学性质.结果 表明,重组酶PRHA2的最适pH值和温度分别为5.0和60℃,K值为(3.039±0.581) mmol/L,Vmax值为(2.032±0.186) μmol/ (min·mg);PRHA3的最适pH值和温度分别为5.5和45℃,Km值为(2.797±0.132) mmol/L,Vmax值为(113.35±1.485) μmol/ (min·mg).PRHA2和PRHA3能够水解人工底物对硝基苯基-α-L-吡喃鼠李糖苷(p-nitrophenyl-α-L-rhamnopyranoside,pNPR)以及α-1,6键的橙皮苷、芦丁;PRHA2对4-硝基苯基-β-D-阿拉伯糖苷(4-nitrophenyl-β-L-arabinoside,pNPA)有一定的水解活性;PRHA3对淫羊藿苷、淫羊藿次苷I、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C这几种物质C-7位的葡萄糖糖苷键有较弱的水解作用.此外,PRHA3能够水解朝藿定C的C-3位以α-Rha(2→1)α-Rha连接的外侧的鼠李糖苷键,在食品及医疗方面具有一定的应用价值.