南瓜MSAP体系的优化及引物筛选

• 作者: 周俊国 姜立娜 江毅
• 来源期刊: 中国蔬菜
• 关键词: 南瓜 MSAP 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 30-36
• 页数: 7页
• 字数: 4430字
• 语种: 中文

摘要

以南瓜自交系北观(Cucurbita maxima)为材料,利用正交设计L16 (45)优化南瓜MSAP预扩增和选择性扩增体系的主要因素.结果 表明,第一步最佳酶切时间2h,Hap Ⅱ(Hpa Ⅱ,Msp Ⅰ)用量0.5μL;第二步酶切时间6h,EcoR Ⅰ用量0.4 μL;连接体系包括酶切产物21 μL,EcoR Ⅰ接头(5μmol·L-1)、HapII接头(5μmol·L-1)各1.0 μL,连接时间12h,T4 DNA Ligase用量为0.5μL;最佳预扩增反应体系(25μL)包含2.0 μL连接产物,1.5 μL 10×PCR Buffer (Mg2+ plus),2.0 μL dNTP(2.5 mmol·L-1),0.6 μL Taq酶(5U·μL-1),0.4 μL上下游引物(10 μmol·L-1);最佳选择性扩增反应体系为预扩增产物稀释120倍的模板4.0 μL,其他同预扩增体系.最后,利用建立好的MSAP体系进行6％聚丙烯酰胺凝胶电泳验证并筛选出适于南瓜MSAP分析的36对引物,表明优化后的MSAP体系多态性好,体系稳定,可重复,为后续进行南瓜MSAP分析奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周俊国	河南科技学院园艺园林学院河南省园艺植物资源利用与种质创新工程研究中心	85	627	14.0	22.0
2	姜立娜	河南科技学院园艺园林学院河南省园艺植物资源利用与种质创新工程研究中心	34	73	5.0	7.0
3	江毅	河南科技学院园艺园林学院河南省园艺植物资源利用与种质创新工程研究中心	2	2	1.0	1.0