siRNA靶向抑制eIF2α基因对非酒精性脂肪性肝病自噬及凋亡的影响

• 作者: 俞媛洁 吴鹏波 宋琪 张国 谭诗云 郭一天 饶倩
• 来源期刊: 胃肠病学和肝病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: eIF2α 非酒精性脂肪性肝病 自噬 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 论著·肝相关疾病
• 页码范围: 1326-1330
• 页数: 5页
• 分类号: R575
• 字数: 3716字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2019.12.002

摘要

目的 探讨siRNA靶向抑制eIF2α基因对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)细胞模型自噬及凋亡的影响.方法 体外0.6 mmol/L油酸诱导HepG2细胞脂质沉积建立NAFLD细胞模型,将HepG2细胞分为对照组、模型组、eIF2α-siRNA干扰组、NC-siRNA干扰组.油红O观察各组细胞内脂滴分布.采用Real-time PCR检测各组细胞eIF2αmRNA表达情况.LC3质粒标记绿色荧光蛋白(GFP-LC3)转染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察细胞内绿色点状聚集的自噬小体分布,Honchst 33258染色观察细胞凋亡情况.Western blotting检测自噬、凋亡相关蛋白P62、LC3Ⅱ、Beclin-1、Bcl-2、Bax、Caspase-3及p-eIF2α、eIF2α的表达.结果 Real-time PCR及Western blotting实验表明,与对照组相比,模型组eIF2α蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,eIF2α-siRNA干扰组eIF2α 蛋白及mRNA表达明显下降.与对照组相比,模型组p-eIF2α 表达增加;与模型组相比,eIF2α-siRNA干扰组p-eIF2α表达明显下降.荧光显微镜观察提示,与对照组相比,模型组自噬体数量明显降低;与模型组相比,eIF2α-siRNA干扰组自噬体数量明显增加.Hoechst 33258染色分析提示,与对照组相比,模型组凋亡率明显增加;与模型组相比,eIF2α-siRNA干扰组凋亡率明显减少.Western blotting检测提示,与对照组相比,模型组细胞Bax、P62、Caspase-3蛋白表达均增加,而Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均降低(P均<0.05),经过eIF2α-siRNA干扰后,eIF2α-siRNA干扰Bax、P62、Caspase-3蛋白表达均降低,而Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ增加.结论 siRNA靶向抑制eIF2α 基因通过增强自噬及抑制细胞凋亡改善NAFLD,细胞模型脂肪变性.