CRISPR/Cas9介导的低产尿素黄酒酵母工程菌的构建

• 作者: 吴殿辉 李晓敏 蔡国林 谢广发 谢文娟 陆健
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 黄酒 酿酒酵母 尿素 氨基甲酸乙酯 CRISPR/Cas9
• 年，卷（期）: 2019,（13）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 45-51
• 页数: 7页
• 字数: 4394字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.020335

摘要

通过代谢工程改造构建低产尿素的酿酒酵母工程菌,从根源上减少黄酒发酵液中尿素的含量及氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)的形成.该研究利用融合PCR构建DUR3过表达组件“HOL-PGK1 p-DUR3-PGK1t-HOR”,通过CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术转化酿酒酵母S.cerevisiae NaDUR1,2-Δcar1,在敲除CAR1和过表达DUR1,2基因的基础上过表达DUR3基因,获得工程菌S.cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1.实验室黄酒发酵实验结果表明,与亲本菌株S.cerevisiae Na相比,工程菌S.cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1所酿黄酒发酵液中尿素含量降低了92.1％,EC含量降低了58.6％;与出发菌株S.cerevisiae NaDUR1,2-Δcar1相比,工程菌S.cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1所酿黄酒发酵液中尿素含量降低了43.4％,EC含量降低了16.2％.过表达DUR3的工程菌S.cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1具有“尿素吸收”的能力,减少EC的形成.借助CRISPR/Cas9系统,构建的酵母工程菌无外源抗性基因的引入,具有工业化应用的潜在可能性.