miR-147a对子宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的作用及其机制的探讨

• 作者: 李圃 胡元晶 郭正晨
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 557-560
• 页数: 4页
• 字数: 5093字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2019.08.010

摘要

目的 探讨微小RNA 147a (miR-147a)对子宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的作用及其可能的作用机制.方法 (1)应用实时RCR技术检测miR-147a和表皮生长因子受体(EGFR) mRNA在正常子宫上皮细胞系HcerEpic细胞以及子宫颈癌细胞系C-33A、CaSKi、HeLa细胞中的表达,选取其中低表达miR-147a和高表达EGFR mRNA的子宫颈癌细胞系(即HeLa细胞)进行后续实验.(2)实验分为3组,即转染组[转染miR-147a模拟物(mimics-miR-147a)]、阴性对照组[转染阴性对照模拟物(mimics-NC)]、空白对照组(未转染),四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染后3组HeLa细胞的存活率,克隆形成实验检测转染后3组HeLa细胞的增殖能力,穿膜小室(transwell小室)的体外侵袭实验检测转染后3组HeLa细胞的侵袭能力,实时RCR技术和蛋白印迹法检测转染后3组HeLa细胞中EGFRmRNA和蛋白的表达.(3)实验分为4组,即mimics-NC+ EGFR野生型(EGFR-WT)组、mimics-NC+EGFR突变型(EGFR-Mut)组、mimics-miR-147a+EGFR-WT组、mimics-miR-147a+EGFR-Mut组,采用双荧光素酶报告基因实验检测4组肾上皮细胞系293T细胞中EGFR基因的启动子活性(以相对发光值表示).结果 (1) C-33A、CaSKi、HeLa细胞中EGFR mRNA的表达水平均显著高于HcerEpic细胞(P＜0.05),其中HeLa细胞中EGFR mRNA的表达水平最高;C-33A、CaSKi、HeLa细胞中miR-147a表达水平均显著低于HcerEpic细胞(P＜0.01),其中HeLa细胞中miR-147a的表达水平最低.故选用HeLa细胞进行以下实验.(2)转染组、阴性对照组、空白对照组HeLa细胞的存活率分别为(63.]±1.2)％、(99.2±1.8)％、(100.0±1.5)％,克隆形成率分别为(51.3±0.3)％、(96.7±0.3)％、(100.0±0.3)％,穿膜细胞数分别为(12.3±3.1)、(44.3±4.5)、(48.3±2.5)个,上述指标转染组均显著低于阴性对照组、空白对照组(P＜0.01);转染组、阴性对照组、空白对照组HeLa细胞中EGFR mRNA的表达水平分别为0.32±0.04、0.97±0.06、1.00±0.04,EGFR蛋白的表达水平分别为0.32±0.03、0.57±0.03、0.62±0.03,转染组EGFRmRNA和蛋白的表达水平均显著低于阴性对照组、空白对照组(P＜0.01).(3)双荧光素酶报告基因实验检测显示,mimics-NC+ EGFR-WT组、mimics-NC+ EGFR-Mut组、mimics-miR-147a+ EGFR-WT组、mimics-miR-147a+EGFR-Mut组293T细胞中EGFR基因的启动子活性分别为3.57±0.37、3.83±0.25、1.09±0.13、3.63±0.46,mimics-miR-147a+EGFR-Mut组显著高于mimics-miR-147a+ EGFR-WT组(P＜0.01),mimics-miR-147a +EGFR-WT组显著低于mimics-NC+ EGFR-WT组(P＜0.01),mimics-NC+EGFR-WT组与mimics-NC+EGFR-Mut组比较无显著差异(P＞0.05).结论 miR-147a表达上调通过调控靶基因EGFR的表达抑制子宫颈癌HeLa细胞的增殖和侵袭.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡元晶	天津市中心妇产科医院妇瘤科	19	107	6.0	9.0
2	李圃	天津市中心妇产科医院妇瘤科	3	2	1.0	1.0
3	郭正晨	天津市中心妇产科医院妇瘤科	1	0	0.0	0.0