CLARITY组织透明化技术在蜜蜂肠道组织上的运用

• 作者: 何楠 张洋逸 李佳欢 陈文锋 黄伟峰 黄少康
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 西方蜜蜂 东方蜜蜂微孢子虫 组织透明化技术 肠道 激光共聚焦显微镜 原位杂交
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 703-709
• 页数: 7页
• 分类号: Q965.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2019.06.006

摘要

[目的]以西方蜜蜂Apis mellifera工蜂肠道为例探究组织透明化技术——丙烯酰胺交联替换脂质透明硬化成像/免疫染色/原位杂交兼容组织水凝胶(clear lipid-exchanged acrylamide-hybridized rigid imaging/immunostaining/in situ hybridization-compatible tissue-hYdrogel,CLARITY)在昆虫组织上的应用,确定CLARITY与荧光原位杂交(FISH)相结合在昆虫肠道组织透明化中的适用性.[方法]依照CLARITY技术操作程序,用水凝胶固定西方蜜蜂肠道,并以被动方式透明化,再用靶向东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae 16S rRNA带异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记和靶向真核细胞18S rRNA带Texas RED标记的寡核苷酸荧光探针进行肠道组织的荧光原位杂交,然后用DAPI(蓝色)进行细胞核复染,通过激光共聚焦显微镜观察透明化的染色组织.[结果]首次成功将西方蜜蜂肠道组织透明化.在激光共聚焦显微镜下,观察到马氏管的原始分布形态,以及东方蜜蜂微孢子虫在中肠末端分布更密集的空间分布特征,并实现了对肠道组织的3D重构.[结论]CLARITY能应用于蜜蜂肠道组织透明化,透明化组织能进行原位杂交和激光共聚焦观察.CLARITY和FISH相结合免除抗体制备和石蜡切片的麻烦,直观展示肠道内部的真实状态,为昆虫生理病理研究提供了一种可靠特异的标记方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄少康	福建农林大学蜂学学院	39	222	8.0	13.0
2	黄伟峰	福建农林大学蜂学学院	3	4	2.0	2.0
3	何楠	福建农林大学蜂学学院	2	0	0.0	0.0
4	李佳欢	福建农林大学蜂学学院	7	4	1.0	1.0
5	陈文锋	福州大学生命科学研究所	3	0	0.0	0.0
6	张洋逸	福建农林大学蜂学学院	1	0	0.0	0.0