定点突变改善PvEH1对邻甲基苯基缩水甘油醚的催化特性

• 作者: 宗迅成 李闯 王婷婷 胡蝶 苏永君 邬敏辰 阚婷婷
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 环氧化物水解酶 定点突变 催化活性 动力学拆分 邻甲基苯基缩水甘油醚
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 9-16
• 页数: 8页
• 分类号: Q814.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20190602

摘要

环氧化物水解酶能够对外消旋环氧化物进行动力学拆分保留单构型的环氧化物.测定了菜豆环氧化物水解酶(PvEH1)针对苯基缩水甘油醚及其甲基衍生物的催化特性,并基于分子对接及多序列比对分析确定7个突变位点,通过单点和组合突变对PvEH1进行改造,以期改善PvEH1对邻甲基苯基缩水甘油醚(1a)的催化特性.底物谱分析表明PvEH1对1a的催化活性(157.2U/g湿细胞)和对映选择性(E=5.6)最高.单点突变结果显示E.coli/pveh1L105I和E.coli/ pveh1V106I对1a的催化活性和对映选择性均有明显提高;L105I和V106I位组合突变菌株E.coli/pveh1L1051/V106I的催化活性(493.8U/g湿细胞)是E.coli/pveh1的3.1倍,对映选择性(E=8.3)也提高至E.coli/pveh1的1.5倍.纯化后PvEH1L105I/V106I的催化活性为17.6U/mg,是PvEH1的1.5倍,对1a的催化效率提高至PvEH1的2.1倍.SDS-PAGE分析表明提高了蛋白质的可溶性表达量.利用E.coli/pveh1L1051/V1061全细胞催化100mmol/L 1a水解动力学拆分获得手性纯(R)-1a (ee ＞96％)的产率和时空产率分别为31.2％和5.12g/(L·h),因此,在手性纯(R)-1a的制备中,E.coli/pveh1L105I/V106I是一种颇具潜力的生物催化剂.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邬敏辰	江南大学无锡医学院	163	1504	22.0	29.0
2	胡蝶	江南大学无锡医学院	20	38	3.0	5.0
3	王婷婷	江南大学药学院	12	23	3.0	4.0
4	宗迅成	江南大学生物工程学院	3	4	1.0	2.0
5	阚婷婷	江南大学药学院	4	4	1.0	2.0
6	李闯	江南大学生物工程学院	10	7	2.0	2.0
7	苏永君	江南大学药学院	2	0	0.0	0.0