土霉素完全抗原的制备及ELISA检测方法的建立

• 作者: 孙亚宁 张改平 曹夕丹 曹金博 李燕虹 王耀 胡骁飞 邓瑞广 邢云瑞
• 来源期刊: 食品与机械
• 关键词: 土霉素 完全抗原 多抗血清 ELISA
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 安全与检测
• 页码范围: 77-83
• 页数: 7页
• 字数: 4027字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13652/j.issn.1003-5788.2019.09.015

摘要

为制备土霉素(Oxytetracycline,OTC)完全抗原,获得免疫学特性良好的土霉素鼠源多抗血清并建立OTC免疫学检测方法,采用重氮化法在OTC分子上引入羧基,进而利用改进碳二亚胺法将其与载体蛋白偶联制备完全抗原,通过红外扫描、紫外扫描和凝胶电泳鉴定其偶联效果,然后将完全抗原免疫BLAB/c小鼠获得多抗血清(pAb)并对其免疫学特性进行鉴定,通过优化条件建立OTC间接竞争ELISA检测方法.结果表明,偶联效果良好,免疫的4只小鼠多抗血清效价均达到1︰12800;4只小鼠多抗血清均有抑制效果,其中2号小鼠产生的多抗血清效果最佳,基于该多抗血清建立的OTC间接竞争ELISA检测方法半数抑制浓度(IC 50)为32.92 ng/mL,检测限(LOD)为1.3 ng/mL,牛奶样品中添加回收率在84.70％～87.45％,与金霉素、四环素的交叉反应率分别为5.27％,4.10％,与其他竞争物交叉反应率<0.4％.该试验成功合成了OTC完全抗原,获得了免疫学特性良好的OTC多抗血清,并建立了OTC免疫学检测方法.