Cre-loxP重组酶技术敲除酿酒酵母丙酮酸脱羧酶编码基因pdc1和pdc5

• 作者: 刘磊 王长丽 葛菁萍
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 酿酒酵母 丙酮酸脱羧酶 醋酸锂转化法 2,3-丁二醇
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 479-485
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 4585字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2019.04.004

摘要

目的:分别构建含有酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因pdc1和pdc5同源序列loxP-kanMX-loxP的质粒,敲除丙酮酸脱羧酶基因.方法:以两端含40 bp pdc1或pdc5的同源序列为引物,以pUG6质粒DNA为模板,通过PCR扩增loxP-kanMX-loxP基因敲除片段,将其分别插入pMD18-T、pEASY-T3,构建表达载体pTWCL-PDC1与pTWCL-PDC5并测序,构建后的质粒利用醋酸锂转化法转化酿酒酵母H5,经筛选鉴定后进行摇瓶发酵试验.结果:分别含有1693、1672 bp目的片段pdc1-loxP-kanMX、pdc5-loxP-kanMX的质粒pTWCL-PDC1与pTWCL-PDC5构建成功,发酵试验显示重组酿酒酵母H5-01与H5-02较原始菌株的乙醇产量分别下降了14.53％与17.54％,证明pdc1或pdc5基因被敲除.结论:利用Cre-loxP重组酶技术分别敲除了酿酒酵母pdc1和pdc5基因,为后续在酿酒酵母中连续敲除pdc1和pdc5奠定了良好的技术基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	葛菁萍	黑龙江大学农业微生物技术教育部工程研究中心	86	718	16.0	23.0
5	王长丽	黑龙江大学农业微生物技术教育部工程研究中心	7	9	1.0	3.0
9	刘磊	黑龙江大学农业微生物技术教育部工程研究中心	7	19	2.0	4.0