幽门螺杆菌金属蛋白酶原核表达载体的构建与重组表达及纯化

• 作者: 何梦雅 余飞艳 张荣光 段广才 王海燕 范清堂 郗园林 陈帅印
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 金属蛋白酶 基因克隆 融合表达 麦芽糖结合蛋白
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1273-1276,1281
• 页数: 5页
• 分类号: R378.911
• 语种: 中文
• DOI: 10.13350/j.cjpb.191107

摘要

目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pyloriHp)金属蛋白酶(metalloprotease,Mtp)基因mtp与麦芽糖结合蛋白基因mbp融合表达载体,诱导Mtp重组表达并纯化表达产物,为Hp致病机制和疫苗研究奠定基础.方法 应用PCR从Hp郑州分离株MEL-Hp27的DNA扩增mtp基因,经纯化回收后与克隆载体pMD19-T连接,并进行测序验证.对重组质粒pMD19-T-mtp双酶切,酶切目的片段克隆至表达载体pMAL-c2X,然后用重组质粒pMAL-mtp转化大肠埃希菌(E.coli TB1).从大肠埃希菌重组子中提取重组质粒,进行酶切和测序鉴定.用分光光度计测定重组菌的生长曲线.用IPTG诱导mtp表达,用SDS-PAGE法分析表达产物,并用Amylose树脂预装柱纯化Mtp蛋白.结果 PCR扩增的mtp基因片段长度为621 bp,重组菌株的酶切和测序鉴定正确;重组菌生长曲线显示重组质粒的转入对受体菌的生长无显著影响;Mtp诱导表达和纯化产物的SDS-PAGE显示,Mtp表达产物为相对分子质量为66.4×103的水溶性融合蛋白(rMtp),纯化产物的纯度约为85.6％.结论 成功构建mtp基因与麦芽糖结合蛋白mbp基合表达载体,并纯化制备了重组蛋白,为探索Mtp在Hp感染发病机制和抗Hp感染疫苗研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段广才		174	980	15.0	21.0
2	郗园林		119	673	13.0	20.0
3	王海燕		62	372	11.0	16.0
4	范清堂		27	106	6.0	8.0
5	张荣光		35	99	6.0	8.0
6	余飞艳		4	0	0.0	0.0
7	陈帅印		26	104	6.0	9.0
8	何梦雅		3	0	0.0	0.0