敖汉细毛羊BMP4基因质粒的构建及在成纤维细胞中表达量的研究

• 作者: 刘开东 刘积凤 张梦瑶 杨峰 柳楠 薛明 贺建宁
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 敖汉细毛羊 成纤维细胞 质粒构建 BMP4基因转染 RT-PCR Western Blot
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 227-234
• 页数: 8页
• 分类号: Q78|S826.03
• 字数: 4777字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.201750810

摘要

旨在构建敖汉细毛羊BMP4基因的质粒及转染成纤维细胞后研究基因表达量的变化.以30日龄的敖汉细毛羊胚胎为研究对象.首先,通过RNA的提取反转录成cDNA参照GenBank中BMP4基因序列信息设计1对引物,通过PCR反应扩增获得BMP4基因片段、将得到的BMP4基因连接到pEASYTM-T1载体,构建pEASYTM-T1-BMP4重组质粒并转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞提取质粒进行酶切鉴定.鉴定正确后构建pcDNA3.1-BMP4重组质粒,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将重组pcDNA3.1-BMP4表达载体转染成纤维细胞,后检测BMP4基因在mRNA和蛋白水平上表达量的变化.结果显示:pcDNA3.1-BMP4构建成功后转染成纤维细胞BMP4基因的mRNA和蛋白表达量均显著上升,且转染组的表达量极显著地高于对照组(P<0.01).成功构建了敖汉细毛羊BMP4基因的质粒,并且成功转染成纤维细胞,基因在细胞中过表达,结果可为进一步研究其功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛明		11	52	4.0	7.0
2	柳楠	青岛农业大学动物科技学院	58	219	8.0	10.0
3	刘积凤	青岛农业大学动物科技学院	25	109	7.0	9.0
4	刘开东		16	47	5.0	6.0
5	贺建宁	青岛农业大学动物科技学院	32	104	6.0	8.0
6	张梦瑶	青岛农业大学动物科技学院	13	10	2.0	3.0
7	杨峰		8	18	2.0	4.0