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摘要:
目的:构建并鉴定cFLIPL和cFLIPS重组质粒,并观察其在乳鼠心肌细胞中表达并检测转染效率.方法:利用基因合成技术获取cFLIPL和cFLIPS基因,分别连接pAd-CMV-GFPa1-IRES载体质粒,并转移至穿梭质粒pAd-cFLIPL和pAd-cFLIPS,经挑选、扩培后进行酶切验证及测序鉴定、包装、扩增、纯化获得一定滴度的pAd-cFLIPL和pAd-cFLIPS,之后感染原代乳鼠心肌细胞,观察两者在心肌细胞中的荧光表达并用流式细胞仪检测转染效率.结果:酶切验证与理论值相符,测序鉴定结果与目的基因序列一致;pAd-cFLIPL和pAd-cFLIPS感染人胚肾293A细胞后可见大量绿色荧光蛋白表达和聚集,10 d后出现典型的细胞病变,腺病毒包装成功,并测得滴度均为1×109 pfu/ml;同时,在荧光显微镜下可见重组腺病毒感染可在乳鼠心肌细胞中稳定表达并发出绿色荧光,流式细胞仪检测结果显示其转染效率为90.30%±3.62%.结论:成功构建cFLIPL和cFLIPS重组腺病毒表达载体且证实其能安全、有效地感染乳鼠心肌细胞.
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文献信息
篇名 cFLIPL和cFLIPS腺病毒载体的构建及其在心肌细胞中的表达
来源期刊 解剖学杂志 学科
关键词 白细胞介素1β转换酶抑制蛋白 腺病毒载体 质粒 转染 心肌细胞
年,卷(期) 2019,(6) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 557-560
页数 4页 分类号
字数 3674字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1001-1633.2019.06.005
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研究主题发展历程
节点文献
白细胞介素1β转换酶抑制蛋白
腺病毒载体
质粒
转染
心肌细胞
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解剖学杂志
双月刊
1001-1633
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1964
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