幽门螺杆菌四环素耐药与16SrDNA突变的关系

• 作者: 刘芳 印琳 吴芳草 崔古贞 文学琴 朱键 王彩霞 王琼 胡越 谷俊莹 陈峥宏 陈相好 雷静静
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 四环素 耐药性 基因突变 自然转化
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 433-438
• 页数: 6页
• 分类号: R378.99
• 语种: 中文
• DOI: 10.13350/j.cjpb.190413

摘要

目的 了解贵州地区近年来人感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对四环素的耐药性及其16SrRNA基因突变情况,分析两者的相关性. 方法 采用琼脂稀释法对194株临床Hp菌株进行四环素药物敏感性试验;分析儿童感染株及成人感染株四环素耐药性差异;选取14株Hp四环素耐药株和14株四环素敏感株及质控株Hp26695进行16SrRNA基因片段PCR扩增与测序,与GenBank 中 Hp相关序列进行比对分析;选取四环素耐药株H64 PCR扩增16SrRNA基因后自然转化入受体菌Hp 26695,并用四环素药物平板(2μg/ml)筛选耐药克隆,对耐药的单克隆菌株进行16SrRNA基因片段PCR扩增与测序,并与供体菌、受体菌、GenBank 中 Hp ATCC26695的16SrRNA基因进行比对分析. 结果 194株Hp中四环素耐药菌株32株,耐药率为16.49％.其中儿童分离菌株四环索耐药率为18.75％(6/32),成人分离株四环素耐药为16.05％(26/162),两组耐药率比较差异无统计学意义(x2=0.141,P＞0.05).对随机选择的14株耐药菌、14株敏感菌及质控株Hp26695进行16SrRNA基因片段测序分析,耐药株和敏感株共有突变位点有6个,分别为T809C、811+C、872+C、C989T、T1082C、T1103C;有3株耐药株存在与四环素耐药相关的A926C或A926G单碱基突变.经过自然转化,共培养出9个四环素耐药单克隆.将各单克隆转化菌和供体菌H64及受体菌26695的16SrRNA基因序列与GenBank中Hp ATCC26695比对,9株单克隆转化菌和供体菌H64一致,均存在A926G、T1082C、T1103C突变.此外,受体菌26695、供体菌H64及转化菌株均存在T809C、811+C、872+C碱基突变,有4株转化菌分别存在与供体菌H64不一致T1103C和C724T 自发突变. 结论 本实验分离的贵州地区人感染Hp对四环素的耐药率较全国 Hp四环素平均耐药率(8.8％)偏高;贵州地区四环素耐药菌株和敏感菌株16SrDNA均存在突变;T809C、811+C、872+C、T1082C、T1103C为贵州地区Hp常见的自发突变,与四环素耐药无关,而A926G突变与本地区四环素耐药相关;Hp四环素耐药还存在16SrDNA突变之外的机制.