优化建立猪多能性细胞及向神经谱系细胞特异性分化

• 作者: 张犇 文丽波 李宇 李雪 梁晨 牛淑冬 王玉阁 雷蕾 齐晓娟
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎成纤维细胞 重编程 诱导多能性细胞 神经分化 维甲酸 免疫荧光 猪
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 神经生物学
• 页码范围: 24-28
• 页数: 5页
• 分类号: R329
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.01.005

摘要

目的 探讨建立猪多能性细胞(iPPCs)的优化方案,并探求其向神经谱系细胞特异性分化的方法.方法 利用经典的Yamanaka方法,联合应用组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸(VPA)、甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-AZA)及Oct4病毒的重复感染,优化重编程方案,诱导巴马小型猪胚胎成纤维细胞为诱导的iPPCs.通过Real-time PCR检测重编程过程中多能性基因的分子表达.通过维甲酸(RA)及细胞外基质(ECM)的联合培养,诱导iPPCs向神经谱系细胞特异性分化,免疫荧光细胞化学方法检测神经特异性标记物表达.结果 应用优化方案,将猪胚胎成纤维细胞重编程为iPPCs.Real-time PCR显示,VPA和Oct4病毒的重复感染可显著促进重编程过程中多潜能基因的表达.5-AZA未显著提高多潜能基因的表达.RA及ECM的联合培养可诱导iPPCs向神经谱系细胞分化,并表达神经特异性标志基因神经元类型Ⅲβ-微管蛋白(Tuj1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP).结论 在利用优化方案建立猪多能性细胞的基础上,将其向神经谱系细胞特异性分化,对人类神经性疾病的细胞替代治疗具有重要意义.