小反刍兽疫病毒N蛋白阻断ELISA方法的建立

• 作者: 刘茂军 张纹纹 李基棕 李文良 杨蕾蕾 毛立 江杰元 郝飞
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 N蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 114-120
• 页数: 7页
• 分类号: S852.6
• 字数: 5356字
• 语种: 中文

摘要

小反刍兽疫(PPR)是一种跨国传播的重大烈性传染病,主要发生于山羊和绵羊等小反刍动物,具有高发病率和死亡率.小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白是抗体检测的主要靶蛋白,本研究将PPRV Nigeria 75/1毒株的N蛋白进行原核表达,重组蛋白经鉴定和纯化后免疫BALB/c小鼠.取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选针对PPRV N蛋白的阳性单克隆细胞株,获得了具有阻断效果的单克隆抗体1B11株.经免疫荧光方法鉴定该单克隆抗体与PPRV Nigeria 75/1毒株发生特异性反应.用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记1B11抗体作为阻断抗体,建立了检测PPRV抗体的阻断ELISA方法.经优化反应条件,抗原的最佳包被浓度为2.5 μg/mL,阻断抗体的最佳浓度为1μg/mL,待检血清1∶2稀释反应1h,底物反应时间为10 min,阴阳性检测临界值为阻断率为58.5％.特异性试验证明该方法与山羊副流感病毒3型(CPIV3)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、边界病病毒(BDV)等阳性血清不发生交叉反应.通过对234份血清样品进行检测,该方法与商品化试剂盒符合率为91％ (213/234).由此表明,建立的阻断ELISA方法可用于PPRV临床样品的抗体水平检测,为PPRV疫苗免疫效果检验及PPRV根除提供了基础.