克氏梭菌硫解酶的鉴定及其功能研究

• 作者: 任聪 徐岩 杨娇
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 克氏梭菌 己酸 硫解酶 转录组
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 79-92
• 页数: 14页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180074

摘要

[目的]硫解酶是梭菌属微生物合成短中链脂肪酸的关键酶.克氏梭菌(Clostridium kluyveri)具有3个高度同源的硫解酶编码基因,对这3个基因的功能鉴定是解析克氏梭菌高己酸合成能力的关键.[方法]通过发酵动力学分析确定克氏梭菌的己酸和丁酸生成动力学特征;转录组测序结合反转录-荧光定量RCR分析克氏梭菌3个硫解酶编码基因的表达水平和时序表达特征;在大肠杆菌中异源表达这3个硫解酶,并对其硫解酶动力学参数进行测定.[结果]克氏梭菌生成丁酸、己酸、辛酸,其中己酸为主要代谢产物;转录组数据显示,在乙酸消耗完全之前,thlA1基因维持恒定表达,thlA2基因表达时序上调,thlA3基因表达时序下调,转录组测序表明3个硫解酶编码基因均具有较高水平的转录活性,thlA2和thlA3的最高表达量分别约为thlA1的29％和43％;硫解酶动力学参数测定结果表明,克氏梭菌3个硫解酶对于四碳底物均显示出相似的底物亲和力(Km),但ThlA1对四碳底物的催化效率(kcat/Km)略低于ThlA2和ThlA3.[结论]克氏梭菌的3个硫解酶均具有催化活性,在克氏梭菌体内均呈活跃表达,表明克氏梭菌拥有3个具有催化活性的硫解酶,这为后续深入研究克氏梭菌己酸合成机理奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐岩	江南大学生物工程学院酿酒科学与酶技术研究中心	233	3264	31.0	46.0
5	任聪	江南大学生物工程学院酿酒科学与酶技术研究中心	9	45	3.0	6.0
9	杨娇	江南大学生物工程学院酿酒科学与酶技术研究中心	4	50	3.0	4.0