胸膜肺炎放线杆菌3种Apx毒素及外膜蛋白Omp2的原核表达及免疫反应性鉴定

• 作者: 万玉萌 安家慧 李玉峰 纪玉洁 郑瑞程
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅠ ApxⅡ ApxⅢ Omp2 原核表达
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 89-93
• 页数: 5页
• 分类号: S852.6
• 字数: 4128字
• 语种: 中文

摘要

猪传染性胸膜肺炎是猪群一种常见的细菌性疾病,给养猪业造成了巨大的经济损失.为了对胸膜肺炎放线杆菌的感染情况进行监测,本研究设计了针对该菌毒素Apx Ⅰ、ApxⅡ、ApxⅢ和外膜蛋白Omp2的全基因PCR扩增引物,以实验室保存的血清2型和5型菌株基因组DNA作为模板成功扩增出特异性基因片段,分别将目的片段克隆入原核表达载体成功构建重组表达质粒pColdI-omp2、pColdI-ApxⅡ、pET-32am-Apx Ⅰ、pCold-ProS2-ApxⅢ.将重组质粒转化Rosetta感受态细胞,通过IPTG诱导表达,应用His单克隆抗体和临床阳性猪血清对表达的重组蛋白上清进行Western blot分析,结果表明表达蛋白的分子量大小与预期相符,通过诱导条件的优化可以稳定表达可溶性蛋白,可溶性蛋白能与His单克隆抗体和临床阳性猪血清发生特异性反应,证明重组蛋白具有良好的免疫反应性.该试验为后期建立胸膜肺炎放线杆菌抗体的ELISA检测方法奠定基础.