卵巢早衰患者来源特异干细胞分化为单倍体细胞的研究

• 作者: 何文 吕杰 蔡柳洪 韩婵琳
• 来源期刊: 新医学
• 关键词: 卵巢早衰 诱导多能干细胞 减数分裂 卵子
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论著
• 页码范围: 249-256
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9802.2019.04.005

摘要

目的 探索卵巢早衰患者来源的诱导多能干细胞(POF-iPSC)分化为单倍体细胞的可能.方法 以卵巢早衰患者外周血单个核细胞进行核转染自行建系POF-iPSC,培养基中添加激活素A、糖原合酶激酶-3抑制剂CHIR-99021共2 d,随后添加骨形态生成蛋白4及表皮生长因子5 d,再添加视黄酸7 d,设基线(D0)、培养7 d(D7)、培养14 d(D14)组及无诱导的对照组.应用实时定量PCR及免疫荧光染色分别检测原始生殖细胞或减数分裂相关基因的mRNA及蛋白表达水平;荧光原位杂交技术(FISH)检测细胞内X染色体单体;流式细胞仪检测单倍体细胞比例.结果 POF-iPSC在诱导过程中,D0组细胞形态为长梭形纤维样,D7组细胞体积变大,但胞质稀薄,具有多个触角,D14组细胞核及核仁变得明显.在mRNA相对表达水平上,NANOG随分化而下降,BLIMP1逐步上升,STELLA、OCT4、DDX4、γH2AX、MLH1于D7组最高,DAZL、SYCP3、PRDM9于D7组及D14组逐步提高(P均<0.01).在蛋白表达上,D0组细胞中DAZL、PRDM9、SCP3蛋白均呈阴性表达,D7组细胞中DAZL及PRDM9蛋白呈阳性表达,D14组细胞中DAZL、PRDM9、SCP3蛋白均呈阳性表达.针对X染色体着丝粒的FISH检测显示,对照组细胞中均未见单个X染色体显色的细胞;D14组的部分细胞核中有单个X染色体显色,提示其单倍体的可能.D0组、D7组、D14组及对照组细胞中均可见发生分裂状态的染色体.其中D14组单倍体细胞比例高于D0组、D7组及对照组(P均<0.01).结论 POF-iPSC体外培养后能分化为类原始生殖细胞,部分细胞可完成减数分裂为单倍体细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何文	中山大学附属第三医院生殖医学中心	25	73	5.0	7.0
2	蔡柳洪	中山大学附属第三医院生殖医学中心	46	107	5.0	7.0
3	吕杰	中山大学附属第三医院生殖医学中心	9	7	2.0	2.0
4	韩婵琳	中山大学附属第三医院生殖医学中心	1	0	0.0	0.0