摘要:
目的:探讨衰老的Ⅱ型肺细胞与电离辐射诱导的放射性肺炎小鼠持续性肺纤维化的机制.方法:使用10周龄的雌性C57Bl/6NCr小鼠,用X-RAD 320(精确X射线,北布兰福德,CT)以2.61 Gy/min的2.0-mm Al过滤(300 kV峰)递送辐射.根据实验要求对不同组的小鼠给予不同剂量的射线处理,分别为0 Gy,5 Gy,17.5 Gy,持续15周.根据实验要求将实验小鼠随机分为3组:对照组(每次射线剂量为0 Gy,n=6);5 Gy组(每次射线剂量为5 Gy,n=6);17.5 Gy(每次射线剂量为17.5 Gy,n=6).根据不同剂量的射线,将小鼠原代培养肺细胞分为原代细胞对照组、5 Gy+原代细胞组、17.5 Gy+原代细胞组、17.5 Gy+DPI+原代细胞组.通过蛋白质印迹法测定 β-gal的蛋白表达水平;通过qRT-PCR分析TNF-α、Caspase-3的mR-NA表达水平;通过TUNEL测定AEC II细胞凋亡情况;通过Masson三色技术分析细胞纤维化程度,免疫组化测定细胞胶原蛋白情况.结果:3周和10周时,对照组AEC Ⅱ细胞凋亡率(7.36±1.25,5.41±1.36)较5 Gy组的(23.71±5.62,16.52±2.58)、17.5Gy组的(32.55±6.48,19.23±2.11)更低(P<0.05);17.5 Gy组的TNF-α、Caspase-3 mRNA表达(3.87±0.55,4.13±0.68)较5 Gy组的(2.56±0.17,2.66±0.21)、对照组的(1.06±0.02,1.12±0.03)升高(P<0.05);17.5 Gy组 β-gal蛋白表达(4.19±3.67)较5 Gy组的(1.37±2.55)、对照组的(1.06±0.36)升高(P<0.05),5 Gy组与对照组比较,差异无统计学意义;通过各原代培养肺细胞中纤维细胞率及胶原蛋白含量比较发现,5 Gy+原代细胞组、17.5 Gy+原代细胞组、17.5 Gy+DPI+原代细胞组较原代细胞对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:衰老的Ⅱ型肺细胞会增加电离辐射诱导的放射性肺炎持续纤维化的发展,还原性辅酶Ⅱ是辐射诱导的Ⅱ型肺细胞衰老和肺持续性纤维化的关键介质.