奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒构建与鉴定

• 作者: 冀德君 夏海磊 张志鹏 李明勋 杨章平 江静宜
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 奶牛乳房炎 溶菌酶 乳腺特异性表达载体 基因治疗
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 24-28
• 页数: 5页
• 分类号: S811.5
• 字数: 4228字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2019.05.005

摘要

研究旨在构建具有高效抗菌、活性持久的奶牛乳腺特异性表达质粒,探索研制新型抗菌制剂,为利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供重要材料.根据GenBank中奶牛溶菌酶基因(lysozyme,Lyz) mRNA序列(GenBank号:NM_180999.1)设计引物,从奶牛乳腺上皮细胞中RT-PCR扩增Lyz基因编码序列,将其克隆到携带增强型绿色荧光蛋白通用型表达载体pEGFP-N1中测序.重组质粒pEGFP-N1-Lyz经Ase I+ Hind Ⅲ双酶切除CMV启动子,将奶牛乳腺特异性表达β-乳球蛋白基因(BLG)启动子同源重组替换到Ase Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点,构建奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒pBLG-EGFP-N1-Lyz,采用脂质体法转染奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)、人肾脏上皮细胞(HEK293T),荧光显微镜检测转染细胞中绿色荧光蛋白的表达情况.结果 表明,重组表达质粒pBLG-EGFP-N1-Lyz测序结果与目的片段长度相符,转染至BMEC细胞和HEK293T细胞,在奶牛乳腺上皮细胞观察到绿色荧光,HEK293T细胞未观察到绿色荧光,奶牛Lyz基因乳腺特异性表达质粒构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨章平	扬州大学动物科学与技术学院	200	1464	19.0	27.0
2	冀德君	扬州大学动物科学与技术学院	93	384	8.0	13.0
3	张志鹏	扬州大学动物科学与技术学院	3	2	1.0	1.0
4	江静宜	扬州大学动物科学与技术学院	3	2	1.0	1.0
5	夏海磊	扬州大学动物科学与技术学院	7	18	1.0	4.0
6	李明勋	扬州大学动物科学与技术学院	16	9	2.0	2.0