eNOS基因G894T变异对血管内皮细胞产生一氧化氮能力的影响及其意义

• 作者: 倪江东 李丁 毛敏之 毛新展 王万春 郑力文 陈丁 魏建伟
• 来源期刊: 中国医师杂志
• 关键词: 内皮,血管 一氧化氮合酶 多态性,单核苷酸 股骨头坏死
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 677-681,687
• 页数: 6页
• 字数: 4659字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1008-1372.2019.05.010

摘要

目的 探索血管内皮细胞一氧化氮合成酶(eNOS)基因多态性对其产生一氧化氮能力的影响及其与缺血性股骨头坏死(ANFH)发病机制的相关性.方法 分别将含894G和894T的eNOS全长CDS片段亚克隆到慢病毒表达载体,转染到血管内皮细胞(HUVEC),在不同时间点检测细胞培养上清中一氧化氮(NO)和鸟苷酸环化酶(cGMP)的含量;用脂质体介导荧光素酶标记的报告质粒pNF-κB-luc与内参对照质粒pRL-TK共转染经LV-eNOS-894G和LV-eNOS-894T及对照慢病毒(LV-NC)转染的HUVEC细胞,待48 h后Western blot法检测各组HUVEC细胞内核因子-κB(NF-κB)、eNOS的蛋白表达.将上述各组HUVEC细胞分别与人成骨细胞hFOB1.19共培养,不同时间点检测细胞培养上清中碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)的浓度.结果 转染eNOS基因(含894G或894T)全长表达慢病毒的细胞培养上清中NO含量和cGMP的含量明显高于空白对照组和空载体组,且894G组NO和cGMP含量显著高于894T组(P＜0.01);与空白对照组相比,转染了eNOS基因的细胞中NF-κB/p65和eNOS蛋白表达水平显著增多,且894G组显著高于894T组;上述各组HUVEC细胞分别与hFOB1.19成骨细胞共培养,在同一时间点,转染eNOS基因(含894G或894T)全长表达慢病毒的细胞培养上清中ALP和OCN浓度明显高于空白对照组和空载体组,且894G组的ALP和OCN浓度显著高于894T组.结论 eNOS基因外显子G894T变异通过eNOS-NO通路使血管内皮细胞产生的NO和cGMP下降,影响了NF-κB/p65和eNOS蛋白的表达水平,使骨组织血管供血减少、成骨细胞活性下降,可能是导致股骨头坏死的致病机制之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王万春	中南大学湘雅二医院骨科	142	1087	15.0	25.0
2	倪江东	中南大学湘雅二医院骨科	76	381	11.0	15.0
3	魏建伟	中南大学湘雅二医院骨科	18	117	7.0	10.0
4	毛新展	中南大学湘雅二医院骨科	32	255	7.0	15.0
5	陈丁	中南大学湘雅二医院骨科	4	9	2.0	3.0
6	郑力文	中南大学湘雅二医院骨科	7	17	3.0	4.0
7	毛敏之	中南大学湘雅二医院骨科	2	7	1.0	2.0
8	李丁	中南大学湘雅二医院骨科	6	14	2.0	3.0