南方红豆杉MCT基因克隆、功能验证及组织表达特异性检测

• 作者: 曾令江 杨春贤 杨颖舫 简东琴
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 南方红豆杉 2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(MCT) 生物信息学分析 功能验证 紫杉醇
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 1408-1416
• 页数: 9页
• 分类号: S791.49
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.07.02

摘要

[目的]克隆南方红豆杉的2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(MCT)基因(TcMCT),分析其功能,并检测组织表达特异性,为深入研究TcMCT基因在紫杉醇生物合成中的作用机制提供理论依据.[方法]采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得TcMCT基因的cDNA全长序列,对其编码蛋白进行生物信息学分析及亚细胞定位,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TcMCT基因的组织表达模式,并在大肠杆菌中超表达该基因以验证其功能.[结果]克隆获得的TcMCT基因cDNA序列全长为1293 bp,开放阅读框(ORF)为942 bp,编码313个氨基酸.TcMCT蛋白与其他植物MCT蛋白中均含保守的MEP结合位点和CTP结合位点,但在N端氨基酸序列保守性较差,其中与同为裸子植物银杏GbMCT蛋白的亲缘关系最近,氨基酸序列的相似性为59.3％.TcMCT蛋白的三级结构与AtMCT蛋白相似,均属于同源二聚体.TcMCT蛋白N端含84个氨基酸残基的质体转运肽,且以Arg88作为切割位点,定位于叶绿体中.TcMCT基因在南方红豆杉不同组织中均有表达,在绿色树皮中的相对表达量显著高于其他组织(P<0.05,下同),且在老叶和嫩叶中的相对表达量显著高于茎和根,在茎和根中的表达量极少甚至不表达.大肠杆菌中超表达TcMCT基因可促进β-胡萝卜素大量积累.[结论]不同物种MCT氨基酸序列具有较高的保守性,TcMCT基因具有明显的组织表达特异性,可调控萜类物质如β-胡萝卜素等的生物合成,推测其在紫杉醇生物合成中发挥重要调控作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨春贤	西南大学生命科学学院	21	153	7.0	11.0
2	曾令江	西南大学生命科学学院	10	41	3.0	6.0
3	简东琴	西南大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
4	杨颖舫		1	0	0.0	0.0