凡纳滨对虾WSSV、IHHNV和CMNV多重PCR检测方法的建立

• 作者: 刘群 吴艳辉 孙金生 徐赟霞 王宇 王菁 耿绪云 薛淑霞 陈浩楠
• 来源期刊: 河北渔业
• 关键词: 多重PCR 白斑综合征病毒 传染性皮下及造血器官坏死病毒 偷死野田村病毒
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 病害防治
• 页码范围: 11-15,20
• 页数: 6页
• 字数: 5671字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-6755.2019.01.005

摘要

根据偷死野田村病毒(CMNV)的保守基因序列,设计筛选出1对特异性引物CMN279,利用.已公布的凡纳滨对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)特异性引物WSS235和IHHN356,建立了一种同时检测WSSV、IHHNV和CMNV的多重PCR检测方法.收集18种病原、健康对虾组织及WSSV、IHHNV、CMNV阳性病料,开展特异性测试,该方法可以特异性扩增出WSSV、IHHNV、CMNV基因片段,健康对虾肌肉组织、其他18种病原均未扩增出任何片段,特异性强.应用克隆方法制备目的基因质粒,应用连续稀释质粒方法开展灵敏度测试,测定该方法检测灵敏度分别为WSSV 9.74 fg、IHHNV7.65 fg、CMNV 10 fg;与已报道的多重PCR检测灵敏度相比较,检测灵敏度提高10倍.应用本研究建立的多重PCR检测方法与实验室标准检验方法同时进行22个样品检验,多重PCR检验方法的检验结果与实验室标准方法检验结果符合率为100％.上述实验结果表明:本研究建立的多重PCR检验方法具有特异性强、灵敏度高、检验时间短、检验结果准确度高的特点,可用于WSSV、IHHNV和CMNV三种病原的快速检测诊断.