稳定表达T-钙黏蛋白的黑色素瘤顺铂耐药细胞株的建立及其生物学特性

• 作者: 何磊 刘利君 段昕所 郭健 陆海涛
• 来源期刊: 中南大学学报（医学版）
• 关键词: T-钙黏蛋白 顺铂 黑色素瘤 耐药性
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1214-1221
• 页数: 8页
• 字数: 5780字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11817/j.issn.1672-7347.2019.180649

摘要

目的:建立稳定表达T-钙黏蛋白(T-cadherin)基因的顺铂(cisplatin,CDDP)耐药黑色素瘤BI6F10细胞株(CDDP-R BI6F10),并研究其生物学特性.方法:采用大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法诱导CDDP-R B16F10细胞株.采用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]法检测CDDP-R B16F10细胞株的增殖能力,并观察CDDP-R B16F10细胞株对CDDP和紫杉醇的敏感性.将T-cadherin互补cDNA插入增强绿色荧光蛋白质粒(enhanced green fluorescent protein plasmid,pEGFP)-N1载体中,获得编码人T-cadherin的质粒载体pEGFP-N1-T-cadherin,再将pEGFP-N1-T-cadherin转染CDDP-R B16F10细胞.分别采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白质印迹法和免疫组织化学SP法检测转染后耐药细胞株T-cadherin的mRNA及蛋白质表达情况.采用MTT法检测T-cadherin联合CDDP对CDDP-R B16F10细胞株增殖的影响,并观察转染T-cadherin后CDDP-R B16F10细胞株对紫杉醇的敏感性.结果:成功建立耐CDDP的CDDP-R B16FI0细胞株.该细胞株同B16F10细胞株比较,其增殖能力差异无统计学意义(P＞0.05).CDDP-R B16F10细胞株和B16F10细胞株对CDDP的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为268.706和19.748 mg/L,耐药指数为13.61.CDDP-RB16F10细胞株和B16F10细胞株对紫杉醇的IC50分别为11.415和7.799 mg/L,耐药指数为1.46.重组真核表达载体pEGFP-N1-T-cadherin构建成功.RT-PCR,蛋白质印迹法和免疫组织化学SP法检测结果显示:CDDP-RB16F10可转录和表达T-cadherin.MTT法显示T-cadherin联合CDDP可抑制CDDP-R BI6F10细胞株的增殖(P＜0.05),析因分析显示T-cadherin与CDDP联合对CDDP-R B16F10细胞株增殖的抑制有交互效应(P＜0.05).T-cadherin联合紫杉醇可抑制CDDP-R B16F10细胞株的增殖(P＜0.05),析因分析显示T-cadherin与紫杉醇联合对CDDP-R B16F10细胞株增殖的抑制无交互效应(P＞0.05).结论:成功建立了稳定表达T-cadherin的CDDP-R B16F10细胞株.T-cadherin可逆转CDDP-R B16F10细胞株对CDDP的耐药性,并能提高CDDP-R B16F10细胞株对紫杉醇的敏感性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段昕所	承德医学院附属医院皮肤科	68	232	9.0	12.0
2	刘利君	承德医学院附属医院皮肤科	13	16	2.0	3.0
3	陆海涛	承德医学院附属医院皮肤科	17	19	2.0	4.0
4	郭健	承德医学院附属医院皮肤科	17	32	3.0	5.0
5	何磊	承德医学院附属医院皮肤科	8	13	2.0	3.0