基于双荧光素酶报告基因系统的人源SREBP1基因启动子的活性研究

• 作者: 房树华 李洪亮 李琛 杨念 汪选斌 赵雅玮 郑燕
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 固醇调节元件结合蛋白1 转录启动子 基因,报告 萤光素酶类 大黄素 蒽醌类 生物信息学
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 897-902
• 页数: 6页
• 分类号: R349.64
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20190215

摘要

目的 构建固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)启动子双荧光素酶报告基因表达载体,为研究针对SREBP1靶点的天然活性抑制剂筛选奠定基础.方法 利用生物信息学软件,对SREBP1基因5′端上游5000 bp序列进行启动子预测与分析.应用Gibson Assembly方法构建启动子双荧光素酶载体,并将构建成功的pGL3-SREBP1-pro重组质粒和内参质粒pRL-SV40共转染肝癌HepG2细胞并给予天然抑制剂大黄素,检测SREBP1转录活性的抑制效果.结果 SREBP1基因5′端上游2000 bp区域内有启动子特征序列,存在转录因子结合位点;重组质粒经酶切及测序鉴定证实为阳性克隆,瞬时转染肝癌HepG2细胞后经双荧光素酶报告基因系统检测,所克隆的片段序列具有启动子活性,该活性可被大黄素所抑制.结论 成功构建了pGL3-SREBP1-pro双荧光素酶报告基因表达载体,并证实其活性,可为进一步用于针对SREBP1靶点的天然活性抑制剂筛选奠定基础.