大鼠髓核细胞来源外泌体对骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化的作用研究

• 作者: 周跃 孙超 李海音 李长青 潘赛 蒋长青 蓝蔚仁
• 来源期刊: 中国脊柱脊髓杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 外泌体 骨髓间充质干细胞 髓核细胞 分化
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 74-81
• 页数: 8页
• 分类号: Q813.1
• 字数: 5973字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-406X.2019.01.12

摘要

目的:探讨大鼠髓核细胞来源外泌体对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核样细胞分化的作用.方法:采用贴壁法体外分离培养SD大鼠尾椎椎间盘髓核细胞和BMSCs,流式细胞术和三系分化实验鉴定BM-SCs.差速离心法分离髓核细胞外泌体,透射电镜观察其形态并使用蛋白免疫印迹(Western blot)检测其蛋白标志物CD81、Tsg101.分别使用荧光探针CM-DIO和CM-DIL标记BMSCs和髓核细胞外泌体,将两者共培养24h后在荧光显微镜下观察BMSCs对髓核细胞外泌体摄取情况.将第三代BMSCs分为三组:外泌体组,加入髓核细胞外泌体(50μg/ml);共培养组,与髓核细胞非接触式共培养;对照组,未做任何处理.分别于7、14、21d时应用荧光定量PCR (qRT-PCR)检测外泌体组和对照组Ⅱ型胶原(COL2A1)、蛋白多糖(ACAN)、SOX9的mRNA表达量.14d时应用qRT-PCR检测3组的COL2A1、ACAN、SOX9的mRNA表达量.结果:提取的第三代大鼠髓核细胞呈多角形或不规则形状,第三代BMSCs呈形态均一的长梭形.BMSCs高表达CD29 (99.77％)、CD44(93.97％)、CD90(99.67％),低表达CD34(0.82％)、CD45 (0.68％).BMSCs成骨、成脂、成软骨诱导后染色均为阳性.透射电镜观察外泌体为30～100nm类圆形双层膜结构,其表达CD81、Tsg101蛋白,不表达Calnexin蛋白.荧光显微镜下CM-DIL标记的外泌体可被CM-DIO标记的BMSCs摄取.诱导7、14、21d后,外泌体组的COL2A1、ACAN、SOX9 mRNA表达量均显著高于对照组(P＜0.05).14d时共培养组COL2A1、ACAN、SOX9的mRNA表达量均显著高于对照组,低于外泌体组(P＜0.05).结论:大鼠髓核细胞外泌体可在体外诱导BMSCs向髓核样细胞分化,且诱导效果优于与髓核细胞的非接触式共培养,可为椎间盘组织工程提供一种有效的髓核细胞来源.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周跃	陆军军医大学第二附属医院骨科	11	48	4.0	6.0
2	李长青	陆军军医大学第二附属医院骨科	4	29	3.0	4.0
3	孙超	陆军军医大学第二附属医院骨科	2	1	1.0	1.0
4	李海音	陆军军医大学第二附属医院骨科	3	7	2.0	2.0
5	蓝蔚仁	陆军军医大学第二附属医院骨科	3	7	2.0	2.0
6	蒋长青	陆军军医大学第二附属医院骨科	3	7	2.0	2.0
7	潘赛	中国人民解放军总医院肾科	1	1	1.0	1.0