稳定过表达IL-9的小鼠CT-26肿瘤细胞株及BALB/C小鼠皮下移植瘤模型的建立

• 作者: 张江磊 朱新国 王进 董晓强 赵华 赵鑫
• 来源期刊: 新医学
• 关键词: 慢病毒转染 IL-9基因 CT-26肿瘤细胞 BALB/C小鼠 异种移植瘤模型
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论著
• 页码范围: 166-173
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9802.2019.03.004

摘要

目的 建立稳定过表达IL-9的小鼠CT-26肿瘤细胞株及BALB/C小鼠皮下移植瘤模型,为后续研究IL-9在结肠癌肿瘤微环境中的作用及其机制提供实验基础.方法 将目的基因IL-9片段插入带有绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体GV492,构建重组过表达IL-9-GV492质粒,转染293T细胞后,用倒置荧光显微镜观察GFP的表达强度,用蛋白免疫印迹法检测IL-9的表达;包装病毒后检测病毒滴度.将过表达IL-9的慢病毒转染小鼠结肠癌CT-26细胞后,用倒置荧光显微镜观察GFP的表达强度,用流式细胞仪检测GFP及IL-9的表达,用qRT-PCR法检测IL-9的mRNA表达.过表达IL-9的CT-26细胞皮下接种BALB/C小鼠建立皮下移植瘤模型后,用免疫组化法检测肿瘤中IL-9的蛋白表达,用qRT-PCR法检测IL-9的mRNA表达.结果 阳性重组质粒PCR扩增产物大小约617 bp,DNA测序显示重组质粒的编码序列与目标序列完全一致.293T细胞自身不表达IL-9,重组质粒转染293T细胞后表达IL-9;慢病毒滴度为2×109 TU/ml.慢病毒转染小鼠结肠癌CT-26细胞后,Control组、LV-NC组、LV-IL-9组GFP表达阳性率分别为0、96.4％、91.2％;LV-IL-9组IL-9的MFI及mRNA的表达均高于LV-NC组(P均<0.05).BALB/C小鼠皮下移植瘤模型建立后,实验组小鼠肿瘤IL-9的阳性表达率及mRNA的表达均高于阴性对照组(P均<0.05).结论 稳定过表达IL-9的小鼠结肠癌CT-26细胞株及BALB/C小鼠皮下移植瘤模型建立成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵华	苏州大学附属第一医院普外科	61	98	5.0	6.0
2	张江磊	苏州大学附属第一医院普外科	20	115	6.0	10.0
3	朱新国	苏州大学附属第一医院普外科	27	52	5.0	6.0
4	董晓强	苏州大学附属第一医院普外科	38	123	6.0	9.0
5	赵鑫	苏州大学附属第一医院普外科	63	311	10.0	15.0
6	王进	苏州大学附属第一医院普外科	31	81	4.0	7.0