缺氧预处理激活AMPK对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

• 作者: 余志斌 张琳 赵汝舟
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 缺氧预处理 缺氧/复氧 心肌细胞 活性氧 腺苷酸活化蛋白激酶
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 120-126
• 页数: 7页
• 分类号: R331.3
• 字数: 5743字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2019.02.05

摘要

目的 探讨缺氧预处理(HPC)激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对缺氧/复氧(H/R)后心肌细胞的保护作用及其可能机制.方法 分离培养新生SD大鼠心肌细胞,建立心肌细胞H/R模型.将心肌细胞随机分为对照组、H/R组、HPC组、H/R+A-769662(AMPK激动剂)组及HPC+Compound C(AMPK抑制剂)组.采用CCK-8比色法检测各组细胞存活率;采用二氢乙啶(DHE)染色法及ATP检测试剂盒分别检测细胞内的活性氧(ROS)及ATP含量;采用Western blotting检测AMPK磷酸化水平及caspase-3激活水平;采用Fluo-3AM染色法观察细胞内游离Ca2+浓度变化;采用TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率的变化.结果 CCK-8测定结果显示,与H/R组比较,HPC组与H/R+A-769662组心肌细胞存活率均明显升高(P<0.05);与HPC组比较,HPC+Compound C组心肌细胞存活率明显降低(P<0.01).DHE染色结果显示,与H/R组比较,HPC组及H/R+A-769662组心肌细胞ROS含量均明显减少(P<0.01);与HPC组比较,HPC+Compound C组心肌细胞ROS含量明显增加(P<0.01).与H/R组比较,HPC组及H/R+A-769662组心肌细胞ATP含量明显增加(P<0.01);与HPC组比较,HPC+Compound C组心肌细胞ATP含量明显减少(P<0.01).Western blotting检测结果显示,与对照组比较,HPC组及H/R+A-769662组心肌细胞AMPK磷酸化水平明显提高(P<0.01),而H/R组及HPC+Compound C组心肌细胞AMPK磷酸化水平变化不明显(P>0.05);与H/R组比较,HPC组及H/R+A-769662组细胞AMPK磷酸化水平明显升高(P<0.05,P<0.01);与对照组比较,H/R组及HPC+Compound C组心肌细胞caspase-3激活水平明显升高(P<0.01);与H/R组比较,HPC组及H/R+A-769662组心肌细胞caspase-3激活水平明显降低(P<0.01,P<0.05).Fluo-3AM染色结果显示,与对照组比较,H/R组与HPC+Compound C组心肌细胞内游离Ca2+明显增加(P<0.01);与H/R组比较,HPC组及H/R+A-769662组心肌细胞内游离Ca2+明显减少(P<0.01);与HPC组比较,HPC+Compound C组细胞内游离Ca2+明显增加(P<0.01).TUNEL染色结果显示,与H/R组比较,HPC组及H/R+A-769662组心肌细胞凋亡率明显降低(P<0.01,P<0.05);与HPC组比较,HPC+Compound C组肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论 H/R可导致心肌细胞ROS生成增加,ATP产生减少,细胞内游离Ca2+增加,进而激活caspase-3,导致细胞凋亡的发生,而HPC通过激活AMPK,可以减少细胞ROS的产生,保证H/R后细胞的能量供应,防止心肌细胞凋亡,进而减轻心肌细胞H/R损伤.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵汝舟	西安空军军医大学航空航天生理学教研室	1	2	1.0	1.0
2	余志斌	西安空军军医大学航空航天生理学教研室	1	2	1.0	1.0
3	张琳	西安空军军医大学航空航天生理学教研室	1	2	1.0	1.0