YAP精氨酸甲基化修饰调控Hippo通路及肿瘤细胞增殖

• 作者: 朱跃 裴华东 赵圆圆 陈亚丽
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: YAP 非小细胞肺癌 精氨酸甲基化修饰 Hippo通路 肿瘤细胞增殖
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 851-857
• 页数: 7页
• 分类号: R734.2|R73
• 字数: 5375字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2019.11.009

摘要

目的 探讨yes相关蛋白(YAP)精氨酸甲基化修饰对Hippo通路激活及肿瘤细胞增殖的影响.方法 在HEK293T细胞中过表达并纯化FLAG-YAP,通过质谱鉴定YAP的精氨酸甲基化修饰及其修饰位点;Western印迹法和体外激酶反应检测YAP精氨酸甲基化修饰对YAP 127位丝氨酸(S127)磷酸化修饰的影响;免疫荧光染色法检测YAP精氨酸甲基化修饰对其核定位的影响.利用慢病毒载体系统构建敲低YAP蛋白的稳定细胞株,在敲低YAP的稳定株中分别回补YAP野生型及其修饰位点突变体,荧光实时定量PCR(q-RT-PCR)检测Hippo通路下游靶基因转录情况,MTS[3-(4,5-dimethylthiaol-2-yl)-5-(3-car-boxy-methoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazoliu-m,inner salt]实验和克隆形成实验检测YAP精氨酸甲基化修饰对肿瘤细胞增殖能力的影响.结果 质谱结果显示YAP 124位精氨酸(R124)存在单甲基化修饰,并受细胞所处营养状况的调控;经体外激酶反应、Western印迹和斑点印迹杂交(Dot blot)验证,YAP R124单甲基化修饰能抑制YAP S127的磷酸化修饰;免疫荧光染色实验证实,YAP R124甲基化修饰促进YAP蛋白入核;q-RT-PCR结果表明,YAP R124甲基化修饰激活Hippo通路下游靶基因转录;MTS和克隆形成实验证实,YAPR 124甲基化修饰促进肿瘤细胞的增殖.结论 YAPR 124单甲基化修饰能抑制YAP S127的磷酸化修饰,促进YAP蛋白进入细胞核,激活Hippo通路下游靶基因转录,进而促进肿瘤细胞增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	裴华东	美国乔治华盛顿大学医学院	1	0	0.0	0.0