永生化绵羊附睾上皮细胞系的建立及其生物学特性分析

• 作者: 宋慧子 张家新 杜炜 栾兆进 王兆琛 赵勇超
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊附睾上皮细胞 永生化 hTERT 基因表达
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 1822-1831
• 页数: 10页
• 分类号: S826.3
• 字数: 6095字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.09.009

摘要

旨在建立绵羊附睾上皮永生化细胞系,为进一步研究绵羊附睾功能调节机制提供基础.本研究采用酶消化法分离培养原代绵羊附睾上皮细胞,利用脂质体将pCI-neo-hTERT质粒转入绵羊附睾上皮细胞(SEECs),经G418筛选得到了细胞系hTERT-SEECs,免疫荧光法鉴定其角蛋白18(CK18)和人端粒酶逆转录亚基(hTERT)表达情况;RT-PCR检测其TERT mRNA的表达;采用CCK-8法绘制细胞生长曲线检测其增殖能力;利用流式细胞仪检测其周期和细胞凋亡情况;核型分析检测其倍体情况;从mRNA和蛋白水平检测其谷胱甘肽过氧化物酶5(GPXS)和雄激素受体(AR)的表达情况.结果 显示,原代绵羊附睾上皮细胞呈典型的铺路石状形态.hTERT成功转入绵羊附睾上皮细胞,传45代后,hTERT-SEECs仍呈铺路石状;hTERT-SEECs仍可稳定表达CK18和hTERT,并且拥有正常的二倍体核型;hTERT-SEECs增殖能力高于原代细胞,hTERT-SEECs处于G1期的细胞比例显著低于SEECs(P＜0.05),处于S期细胞比例显著高于SEECs(P＜0.05),且其活细胞率显著高于SEECs(P＜0.05),凋亡率显著低于SEECs(P＜0.05);hTERT-SEECs和SEECs的GPX5和AR蛋白表达量差异不显著(P＞0.05).本研究所建立的hTERT-SEECs经长期培养后仍具有正常的附睾上皮细胞形态,增殖能力强并保留了附睾上皮细胞的生物学特性.