甘蓝型油菜GPDH基因克隆、表达分析及植物过表达载体构建

• 作者: 付三雄 周小婴 唐容 张超 戚存扣 杨克相 黄莎
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 甘蓝型油菜 甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH) 表达特性 生物信息学 植物过表达载体
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 1399-1407
• 页数: 9页
• 分类号: S565.403.53
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.07.01

摘要

[目的]克隆甘蓝型油菜的甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)基因(BnGPDH),分析其表达特性并构建植物过表达载体,为研究该基因在油菜种子三酰甘油(TAG)合成和积累中的作用机制提供理论参考.[方法]以甘蓝型油菜H105为材料,采用同源克隆技术克隆与At3G07690同源的BnGPDH基因,对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BnGPDH基因在甘蓝型油菜不同组织[根、茎、叶、蕾、花及花后(DAF)7、14、21、30和40 d角果皮和种子]及高、低油含量自交系角果皮和种子中的表达情况,并将克隆获得的BnGPDH基因连接至携带napin启动子的pCAMBIA1390-NAPIN载体上构建植物过表达载体.[结果]克隆获得的BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因编码区(CDS)长度均为1338 bp,编码445个氨基酸,其编码蛋白仅有5个氨基酸差异,均具有NAD_Gly3P_dh_N和NAD_Gly3P_dh_C结构域,定位于细胞质,分别与白菜细胞质型GPDH蛋白(XP_009147040.1)和甘蓝细胞质型GPDH蛋白(XP_013585317.1)的氨基酸序列具有较高相似度,对应的相似度为100.00％和99.78％,且二者与双子叶植物GPDH蛋白亲缘关系较近,与单子叶植物GPDH蛋白亲缘关系较远.BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因在甘蓝型油菜不同组织中均有表达,且表达模式总体上相似,在21DAF和30DAF种子中的表达量显著高于其他组织部位(P<0.05,下同),表明21DAF和30DAF是油菜种子TAG合成和积累的高峰期,但在角果生长发育不同时期这2个基因的表达略有不同,且在茎、蕾、种子(7DAF、21DAF、30DAF和40DAF)和角果皮(7DAF和40DAF)中,BnGPDHc2-1基因的表达量均显著高于BnGPDHc2-2基因,而在14DAF角果皮中BnGPDHc2-2基因的表达量显著高于BnGPDHc2-1基因.21DAF种子中BnGPDHc2-1基因在3个高油含量自交系中的表达量显著高于3个低油含量自交系,BnGPDHc2-2基因在高油含量自交系IL130和IL594中的表达量显著高于3个低油含量自交系;在30DAF种子中,BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2在3个高油含量自交系中的表达量均显著高于3个低油含量自交系.将BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因分别连接至携带na-pin启动子的pCAMBIA1390-NAPIN载体上可成功构建获得植物过表达载体.[结论]BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因在甘蓝型油菜不同发育期角果中行使的功能存在一定分化,在进化过程中可能分别来源于白菜基因组和甘蓝基因组,但均在甘蓝型油菜种子TAG合成和积累发挥重要调控作用.因此,构建的植物过表达载体可用于BnGPDH基因功能分析及油菜种子油含量基因工程改良研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	戚存扣	江苏省农业科学院经济作物研究所	97	1515	22.0	33.0
2	付三雄	江苏省农业科学院经济作物研究所	19	143	7.0	11.0
3	张超	贵州省农业科学院油料研究所	20	153	9.0	12.0
7	周小婴	江苏省农业科学院经济作物研究所	3	19	1.0	3.0
8	唐容	贵州省农业科学院油料研究所	7	4	2.0	2.0
9	黄莎	贵州省农业科学院油料研究所	5	0	0.0	0.0
10	杨克相	贵州省农业科学院油料研究所	8	6	2.0	2.0