重组鸭α-干扰素的抗病毒活性

• 作者: 吴双 吴植 朱善元 洪伟鸣 王安平 王永娟 秦枫 郭艳丽 郭长明
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭 α-干扰素 原核表达 纯化 抗病毒活性
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 1402-1406
• 页数: 5页
• 分类号: S858.32|S859.7
• 字数: 3853字
• 语种: 中文

摘要

本研究参考大肠杆菌密码子的偏好性,对GenBank中已经发表的鸭α-干扰素基因序列进行优化,人工合成后与原核表达载体pET30a-ELP连接,构建原核表达质粒pET30a-DuIFNα-ELP.将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达重组蛋白DuIFNα-ELP.根据类弹性蛋白多肽(ELP)具有温度敏感的可逆相变特性,通过重复可逆相变循环(ITC)纯化重组蛋白质;纯化的蛋白质主要以包涵体的形式存在,通过变性、复性处理后,采用细胞病变抑制法分别在MDCK/VSV和DEF/VSV中检测重组蛋白质的抗病毒活性.结果表明,合成的重组鸭α-干扰素基因能成功表达,重组蛋白DuIFNα-ELP分子质量约80000,纯化后的重组蛋白质纯度约90％.通过抗病毒试验检测重组DuIFNα-ELP在MDCK/VSV系统中的抗病毒活性为1.0×106 U/ml,比活性为1.25×106 U/mg;在DEF/VSV系统中的抗病毒活性为1.0×107 U/ml,比活性为1.25×107 U/mg,比MDCK/VSV系统中活性高10个单位,验证了干扰素的抗病毒活性与受体细胞的应答可能存在一定关系.这一研究结果为鸭α-干扰素防治禽类病毒性疾病的探索奠定了基础.