海洋细菌低温葡萄糖氧化酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 于爽 刘春莹 张庆芳 李美玉 胡善松 迟乃玉
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 低温GOD 大肠杆菌 纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 34-39
• 页数: 6页
• 字数: 4787字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.019994

摘要

为解决细菌葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)活力较低的问题,提取和纯化了实验室保藏海洋细菌Citrobacters sp.8-III的基因组DNA,并与现存GOD基因比对获得目的序列,以此序列为模板获得GOD基因.将人工合成并密码子优化的GOD基因亚克隆至载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a(+)-GOD并转化到E.coli BL21(DE3)中实现表达.经镍柱亲和层析得到较纯的重组GOD,并对其进行酶学性质研究.实验成功构建了产GOD的E.coli BL21(DE3)/pET-28a(+)-GOD,目的蛋白约46 kDa.重组GOD酶活为2.04 U/mL,该酶最适作用温度为25℃;最适作用pH为6.0;K+、Ni2+对GOD的活性有明显促进作用;重组GOD添加至饲料中可加快雏鸡生长,且具备一定防腐功效.该研究首次将海洋细菌GOD基因导入大肠杆菌中,开拓GOD外源表达新的宿主.同时重组GOD具备低温酶特性,为其在饲料添加剂和低温领域应用奠定了基础.