猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 孙立旦 宋勤叶 张庆桥 王一鹏 米建华 赵雪 魏艳秋
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 杂交瘤细胞 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 实验观察
• 页码范围: 31-35,封3
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65+1
• 语种: 中文

摘要

为了制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体,本实验以重组PEDV-N蛋白免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术,经过3～5次亚克隆与筛选,获得了4株分泌抗PEDV McAb的杂交瘤细胞,分别命名为4A7、6C1、5E10和6F7.4株杂交瘤细胞分泌的McAb均为IgM,其轻链均为κ链.ELISA、Western Blot和免疫荧光鉴定结果表明,4株单抗均与N蛋白及PEDV具有良好的结合活性.复苏冻存的4株杂交瘤细胞,连续传代培养30代,4株杂交瘤细胞能够持续稳定分泌抗体,细胞上清的ELISA抗体效价均在1∶800以上.4株细胞诱生的小鼠腹水抗体效价为1∶105～1∶106.将单克隆抗体(4A7)用于免疫组化试验和IPMA时,其能够特异地识别PEDV人工感染猪小肠组织和Vero细胞内的病毒.上述实验结果表明,制备的单克隆抗体可以用于PEDV抗原检测以及体内病毒的组织定位分析,并可为进一步研发PEDV抗原或抗体检测技术奠定基础.