兔源抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抗体的制备及初步应用

• 作者: 仇汝龙 宋艳华 徐为中 朱伟峰 潘渊婷 王芳 胡波 范志宇 陈萌萌 魏后军
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔源抗凋亡蛋白Bcl-2 原核表达 亲和层析 多抗制备
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 1397-1401
• 页数: 5页
• 分类号: S858.291
• 字数: 3716字
• 语种: 中文

摘要

为了原核表达兔源抗凋亡蛋白Bcl-2,并诱导表达纯化该蛋白后制备多抗,采用RT-PCR扩增Bcl-2编码序列,并将该序列克隆至pET-32a(+)载体,获得重组pET-32a-Bcl-2质粒转化BL21(DE3),筛选最佳表达条件,通过亲和层析纯化目的蛋白质,最后经Western blot鉴定后免疫小鼠.结果显示,成功扩增Bcl-2编码序列并构建了pET-32a-Bcl-2表达载体;SDS-PAGE结果显示,在16℃,5 h,0.5 mmol/L IPTG的表达条件下,重组蛋白Bcl-2能够高效可溶性表达;Western blot结果表明纯化后的表达产物为高纯度的Bcl-2重组蛋白,将该蛋白质免疫小鼠后获得了特异性抗体,该抗体能够特异性识别重组Bcl-2蛋白,并应用该抗体鉴定RK13-B细胞中Bcl-2蛋白的过表达.