易错PCR技术定向进化褐藻胶裂解酶Alf-2的分析

• 作者: 张伟 李树 赵春梅
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 易错PCR 定向进化 褐藻胶裂解酶 氨基酸序列
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 146-151
• 页数: 6页
• 分类号: Q814
• 字数: 5740字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20180207-100

摘要

为提高褐藻胶裂解酶活力,采用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对海洋细菌Tamlana sp.S12中具有代表性的酶组分Alg-2进行体外定向进化.经过2轮易错PCR及96孔板发酵筛选,分别获得2株正突变和2株负突变菌株,其酶比活力分别是亲本(2 675.2 U/g)的162％、241％、53％、11％.酶的动力学分析显示,正突变株P2-81的Km值比亲本降低50％,而负突变株N2-47的Km值比亲本提高106％,表明突变株对底物的亲和力有极大的上升和下降.基因测序及氨基酸序列分析结果表明,Glu、Thr、Ser、Asp和Tyr对褐藻胶裂解酶活力提高起到正面的积极作用,而Lys的突变起到负面的消极作用,后续人工合成的定点突变则进一步证实Asp和Lys的正/负作用.本研究有助于深入理解褐藻胶裂解酶的催化机制,为后续利用理性设计手段改造褐藻胶裂解酶提供理论参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张伟	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	76	368	10.0	14.0
2	赵春梅	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	1	1	1.0	1.0