金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEK原核表达、纯化及溶液构象分析

• 作者: 刘骥 唐俊妮 田万帆 赵燕英
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌K型肠毒素 原核表达 纯化 热稳定性 荧光发射谱 圆二色谱
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 138-145
• 页数: 8页
• 分类号: TS20
• 字数: 5574字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20180128-385

摘要

金黄色葡萄球菌K型肠毒素(Staphylococcus aureus enterotoxin K,SEK)由金黄色葡萄球菌肠毒素基因簇编码,流行病学显示,编码SEK蛋白的sek基因在食品源金黄色葡萄球菌菌株中具有较高的检出率,说明SEK也可能是一种重要的食品中毒潜在致病因子.本研究将截去N端信号肽的SEK蛋白编码基因与原核表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a(+)-△Nspsek;通过对sek基因在不同原核表达宿主菌中的表达及表达条件优化分析,确立SEK蛋白的最优表达条件;利用镍亲合层析纯化含组氨酸(His)标签的SEK融合蛋白,将凝血酶切除His标签后的SEK蛋白进行聚合状态及热稳定分析、荧光发射谱和圆二色谱分析.结果 表明,重组蛋白SEK表达成功,热处理导致蛋白部分降解;荧光光谱揭示SEK蛋白在278 nm和295 nm波长处具有相同的最大色氨酸发射峰;344nm波长处表明SEK蛋白处于紧密折叠的天然状态;圆二色谱分析表明,△NspSEK重组蛋白富含β-折叠(23.6％)、β-转角(28％)以及α-螺旋(29.1％)等二级结构.为深入研究SEK蛋白的结构与功能提供基础,也对改进食品加工工艺和提高食品安全具有指导意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵燕英	西南民族大学生命科学与技术学院	22	63	5.0	7.0
2	唐俊妮	西南民族大学生命科学与技术学院	63	286	10.0	12.0
3	刘骥	西南民族大学生命科学与技术学院	21	104	6.0	9.0
4	田万帆	西南民族大学生命科学与技术学院	5	8	2.0	2.0