大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 孙亚宁 曹金博 李燕虹 王耀 胡骁飞 邓瑞广 邢云瑞 陈秀金
• 来源期刊: 食品与机械
• 关键词: Kunitz胰蛋白酶抑制因子 单克隆抗体 免疫学特性
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 页码范围: 59-63
• 页数: 5页
• 字数: 3458字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13652/j.issn.1003-5788.2019.08.011

摘要

为制备免疫学特性良好的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子(Kunitz trypsin inhibitor,KTI)单克隆抗体,以50 μg/只的免疫剂量将KTI免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和敏感性,选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到稳定分泌KTI单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备mAb并对其免疫学特性进行鉴定.结果 表明,1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为157.33 ng/mL,经细胞融合筛选得到4E6-E9阳性杂交瘤细胞株,所制备的抗体效价达到1∶1 638 400,亚型为IgG1型,亲和常数为1.45×108 L/mol,IC50为28.39 ng/mL,且特异性强.说明试验所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立灵敏、特异的KTI免疫学检测方法提供良好的抗体保障.