细胞分裂周期蛋白42结构域突变真核表达质粒的构建与鉴定

• 作者: 宋远见 李振玲 王帝 王玉兰
• 来源期刊: 解剖学杂志
• 关键词: 细胞分裂周期蛋白 鸟嘌呤核苷酸交换因子 结构域 真核表达质粒 突变
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 249-252
• 页数: 4页
• 字数: 2733字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1633.2019.03.007

摘要

目的:构建细胞分裂周期蛋白(Cdc42)的结构域突变质粒,即鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)结构域突变质粒.方法:根据NCBI中小鼠Cdc42全长cDNA序列找到结构域GEF,将GEF的氨基酸突变成丙氨酸,根据突变后的序列设计引物,PCR扩增得到目的片段588 bp,限制性内切酶EcoRI和HindⅢ双酶切后插入到编码红色荧光蛋白(RFP)和his标签的真核表达载体PM-his-RFP中,构建PM-his-Cdc42(GEF)-RFP重组质粒,进行酶切电泳及DNA测序验证.用脂质体介导方法将重组质粒瞬时转染HT22细胞,通过荧光显微镜观察转染效率.结果:经酶切及测序结果显示突变后结构域插入的位置和序列正确,成功构建Cdc42蛋白GEF结构域突变质粒;荧光结果表明,重组质粒顺利转染HT22细胞.结论:成功构建的Cdc42结构域突变质粒为Cdc42蛋白的功能研究提供有效的操作工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋远见	徐州医科大学遗传学教研室	16	49	5.0	6.0
2	王帝	徐州医科大学解剖学教研室	4	6	1.0	2.0
3	李振玲	徐州医科大学解剖学教研室	2	0	0.0	0.0
4	王玉兰	徐州医科大学解剖学教研室	7	6	2.0	2.0